Indagare tessuti e risposte fitocromo organo-specifici utilizzando FACS-Cell-assistita di tipo profili specifici di espressione in Arabidopsis thaliana</em

Summary

Le basi molecolari delle risposte fitocromo spazio-specifica è indagato con le piante transgeniche che presentano tessuti e carenze fitocromo organo-specifiche. L'isolamento di cellule specifiche esporre indotte esaurimento fitocromo cromoforo da Fluorescence-Activated cella Ordinamento seguita da analisi di microarray viene utilizzata per identificare i geni coinvolti nello spazio-risposte specifiche fitocromo.

Abstract

Media luce una serie di processi evolutivi e adattativi per tutto il ciclo di vita di una pianta. Le piante utilizzano la luce di assorbimento delle molecole chiamate fotorecettori di senso e di adattarsi alla luce. Il rosso / lontano-rosso che assorbono la luce fotorecettori fitocromo sono stati studiati ampiamente. Fitocromi esistere come una famiglia di proteine ​​con funzioni diverse e sovrapposte in tutti i sistemi vegetali superiori in cui sono stati studiati

Protocol

1. Crescita delle piante

1. Confermato UAS-BVR GAL4 X-GFP linea trappola enhancer isolato come descritto ⁴ (per sintesi vedi fig. 1) e le linee di wild-type o parentale vengono seminate sul terreno, ovvero ~ 2000 semi sterilizzati per riga.
2. Le piante sono coltivate per 5 settimane in terra sotto illuminazione bianca di 100 μmolm ^-2 s ^-1 a 22 ° C e 70% di umidità.

2. Foglia di protoplasti di isolamento (adattato da Denecke e Vitale ⁹⁾

1. Per isolare protoplasti, preparare TEX buffer. Per buffer di 1 litro TEX, pesare i seguenti componenti: 3,1 g Gamborg di sali B5,....

Discussion

Profili di espressione genica attraverso microarray (1) ha indicato che oltre il 30% dei geni in piantine di Arabidopsis sono regolati luce ¹¹ e (2) ha identificato un vasto gruppo di geni che codificano le proteine ​​luce di trasduzione del segnale coinvolte nella cascata di segnalazione fitocromo ^{12, 13} . Tali esperimenti suggeriscono che la luce induce cambiamenti rapidi e lungo termine espressione genica. Ogni pool di fitocromi può controllare solo un sottoinsieme di risposte di sviluppo e di a.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anticorpo anti-BVR	QED Bioscience Inc.	56257-100
Cellulasi “ Onozuka” R-10	SERVA Elettroforesi	MSPC 0930
Gamborg' s Miscela di sali basali B5	Sigma-Aldrich	G5768
Macerozyme R-10	SERVA Elettroforesi	PTC 001
MES, basso contenuto di umidità	Sigma-Aldrich	M3671
Sali di Murashige e Skoog	Caisson Laboratories	74904
Phytablend	Caisson Laboratories	28302
RNeasy Plant Minikit	Qiagen	16419