利用磁调制生物传感系统的生物检测的快速均质检测
Summary
利用磁调制生物传感系统，迅速，灵敏，简单地检测生物检测的DNA分子和蛋白质，如。
Abstract
磁调制生物传感系统（MMB）[1,2]迅速，并在没有任何清洗或分离步骤的低浓度均匀检测生物指标。当IL – 8的目标，目前，附有一个“sandwich'为基础的检测IL – 8的捕获抗体的磁珠的IL – 8的目标和生物素标记的IL – 8抗体的链霉通过耦合荧光蛋白。磁珠操纵振荡运动，通过采用两个电磁两极交变磁场梯度。凝结成的荧光蛋白质，这是附着在磁珠检测区域和他们的运动和正交激光束产生一个周期性的使用同步检测荧光信号解调。以前使用的磁调制生物传感系统检测茨城病毒非结构蛋白3（NS3区）互补DNA（cDNA）的[2]的编码序列。外部操纵和颗粒凝结在这项工作中表现出的技术可用于其他应用程序，如提供磁耦合的药物<em>在体内</em>或提高对比度<em>在体内</em>成像应用。
Protocol
IL – 8含量： 反应混合物包括以下四个部分，在各自的浓度100μL缓冲液的最终体积。 10μL100珠/μL终浓度，2μL生物素IL – 8抗体nano-gram/μl终浓度为1，1μL和素荧光蛋白20nano-gram/μl终浓度与捕获抗体的磁珠， 0.48pico-gram/μl和1μl的IL – 8的目标。这些组件被添加缓冲液，然后30分钟动摇。 一个控制反应是准备没有IL – 8的目标相同的方式。 反应后放置的试管中，没有任何分离或洗涤步骤…
Discussion
综上所述，我们发现，MMB系统可用于检测低浓度（0.5微微克的生物复杂精密临的细胞因子的检测[3,4]的检测限）的IL – 8的目标存在。该系统的能力并不局限于IL – 8和可用于检测其他蛋白质。 MMB系统的优点是能够迅速地检测到目标，并没有任何分离或洗涤步骤。因此，它有利于在检测过程中，允许系统在现场应用中使用。
Acknowledgements
部分支持这项工作是由Ishaya霍洛维茨基金。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bio-Plex Pro Human Cytokine IL-8 set | Bio-Rad | 171-B5008M | ||
| Recombinant human IL-8 target | Thermo Scientific | R202625 | ||
| Biotinylated monoclonal mouse anti human IL-8 antibody G265-8 | BD Biosciences | 554718 | ||
| Streptavidin coupled fluorescent protein | Bio-Rad | Streptavidin PE |
Riferimenti
- Danielli, A., Arie, A., Porat, N., Ehrlich, M. Detection of fluorescent-labeled probes at sub-picomolar concentrations by magnetic modulation. Optics Express. 16, 19253-19259 (2008).
- Danielli, A., Porat, N., Arie, A., Ehrlich, M. Rapid homogenous detection of the Ibaraki virus NS3 cDNA at pico-molar concentrations by magnetic modulation. Biosensors and Bioelectronics. 25, 858-863 (2009).
- . . Bio-Rad “Human angiogenesis assay panel”. , .
- . Instruction Manual. Bio-Plex Precision Pro Cytokine Assay. , .
Tags
Magnetic Modulation Biosensing SystemBiological AssaysDetectionIL-8 TargetSandwich-based AssayMagnetic BeadsIL-8 Capture AntibodyStreptavidin Coupled Fluorescent ProteinBiotinylated IL-8 AntibodyAlternating Magnetic Field GradientOscillatory MotionFluorescent ProteinsDetection AreaOrthogonal Laser BeamPeriodic Fluorescent SignalDemodulationNon-structural Ibaraki Virus Protein 3 (NS3)Complementary DNA (cDNA)External ManipulationCondensation Of ParticlesMagnetically-coupled DrugsIn-vivo Imaging Applications
Citazione di questo articolo
Danielli, A., Porat, N., Ehrlich, M., Arie, A. Rapid Homogeneous Detection of Biological Assays Using Magnetic Modulation Biosensing System. J. Vis. Exp. (40), e1935, doi:10.3791/1935 (2010).