Immunohistochemistry के लिए स्लाइस तैयारी की पतली सेक्शनिंग
Summary
वर्तमान विधि छोटे मुश्किल का प्रबंधन करने के लिए, जैसे ऊतक के टुकड़े, बायोप्सी और मस्तिष्क स्लाइसें की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य cryostat सेक्शनिंग अनुमति देता है. हम एक सरल एल्यूमीनियम ठंड चरण के लिए ऊतक की हैंडलिंग और एक मानक के लिए नियमित रूप से 400 माइक्रोन मोटी मस्तिष्क स्लाइसें में से 5-10 माइक्रोन धारावाहिक वर्गों उत्पादन cryostat की सुविधा का उपयोग.
Abstract
तंत्रिका विज्ञान, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से अन्य विषयों में कई जांच, छोटे अध्ययन शामिल है, अभी तक macroscopic टुकड़े या ऊतक के वर्गों, कि संरक्षित किया गया है हौसले से हटाया, या excised लेकिन व्यवहार्य रखा के रूप में मस्तिष्क के ऊतकों का टुकड़ा तैयारी में,. इस सामग्री के बाद सूक्ष्म अध्ययन, चुनौतीपूर्ण हो सकता है के रूप में ऊतकों के नमूनों को संभालना मुश्किल हो सकता है. यहाँ का प्रदर्शन किया मोटाई 0.2-5.0 मिमी से लेकर सकता है के साथ ऊतक की पतली cryostat वर्गों को प्राप्त करने के लिए एक विधि है. हम नियमित रूप से 400 माइक्रोन मोटी Vibratome मस्तिष्क स्लाइसें serially 5-10 माइक्रोन राज्याभिषेक cryostat वर्गों में कटौती. स्लाइस आम तौर पर कर रहे हैं पहली बार इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया और तब क्षेत्र है जिसमें से रिकॉर्डिंग मनाया गया cytoarchitecture के सूक्ष्म विश्लेषण की आवश्यकता है. हम एक सरल युक्ति है कि नियंत्रित और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तैयारी और ऊतकों टुकड़ा की स्थिति की अनुमति देता है का निर्माण किया है. इस डिवाइस 1.2 सेमी की एक व्यास है, जो टुकड़ा के लिए एक ठंड चरण के रूप में कार्य करता है के साथ एक सिलेंडर 5 सेमी लंबाई में होते हैं. एक अंगूठी snugly अनुमति ऊतक ठंड परिसर में विसर्जित करने के लिए (उदाहरण के लिए, अक्टूबर) टुकड़ा भर सिलेंडर प्रदान दीवारों पर स्लाइड. यह तो जल्दी कुचल सूखी बर्फ के साथ जमे हुए और जिसके परिणामस्वरूप वफ़र स्थिति cryostat सेक्शनिंग के लिए आसानी से किया जा सकता है. पतला वर्गों जा सकता पिघलना घुड़सवार लेपित स्लाइड्स पर ऐसे विभिन्न धुंधला तरीके के रूप में में आगे के अध्ययन किया जा करने के लिए, स्वस्थानी संकरण, या immunohistochemistry में, जैसा कि यहाँ प्रदर्शन की अनुमति है.
Protocol
Discussion
यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल के साथ प्रदान करता है शोधकर्ताओं के एक संक्षिप्त, आसान करने के लिए कैसे प्राप्त करने के लिए छोटे मुश्किल का प्रबंधन करने के लिए, और प्रदर्शन किया जा करने के लिए आगे के अध्ययन के लिए बायो…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| O. C. T. | Ted Pella, Inc | 27050 | ||
| Glycerol Solution | 30% Glycerol Solution in PBS w/v | |||
| Sucrose Solution | 30% Sucrose Solution in PBS w/v |
Riferimenti
- Scoutern, C. W., O’Connor, R., Cunningham, M. Perfusion fixation of research animals. Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).
- Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat. Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).
