Isolering av mänskliga Umbilical arteriella glatta muskelceller (HUASMC)
Summary
Navelsträngen används för att isolera glatta muskelceller av olika sätt. I detta arbete använde vi enzymatisk behandling till isolerade glatta muskelceller.
Abstract
Den mänskliga navelsträng (UC) är ett biologiskt prov som enkelt kan erhållas strax efter födseln. Denna biologiska prov, för det mesta, kasseras och insamlingen inte innebär någon extra risk för det nyfödda barnet eller modern hälsa. Dessutom inga etiska frågor väcks. UC är komponerad av en ven och två artärer som både endotelcellerna (ECS)<sup> 1</sup> Och glatta muskelceller (SMC)<sup> 2</sup> Kan två av de viktigaste cellulära komponenterna i blodkärl, isoleras. I detta projekt SMC erhölls efter enzymatisk behandling av UC artärerna därför den experimentella procedur som tidigare beskrivits av Jaffe<em> Et al</em<sup> 3</sup>. Efter cell isolering de hölls i t-blixt med DMEM-F12 kompletterad med 5% fetalt bovinserum och odlades i flera passager. Celler behöll sin morfologiska och andra fenotypiska egenskaper i olika generationer. Syftet med denna studie var att isolera glatta muskelceller i syfte att använda dem som modeller för framtida analyser med constrictor droger, isolera och strukturellt präglar L-typ kalciumkanaler, för att studera cellulära och molekylära aspekter av den vaskulära funktionen<sup> 4</sup> Och använda dem i vävnadsteknik.
Protocol
Discussion
SMC kan användas som modeller för framtida analyser med constrictor droger, att isolera och strukturellt präglar L-typ kalciumkanaler, för att studera cellulära och molekylära aspekter av vaskulär funktion och använda dem i vävnadsteknik. SMC och ECS är grundläggande för utvecklingen av nya biomaterial som kan användas i produktionen av semi syntetiskt blodkärl för att användas på människa.
Acknowledgements
Sjukhus Amato Lusitano, Castelo Branco Portugal.
Sjukhus Sousa Martins, Guarda Portugal.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-F12 | Sigma-Aldrich | 095K8311 | ||
| Fetal bovine serum (FBS) | Biochrom-AG | 0117T | ||
| RPMI 1640 | Gibco | 3103806 | ||
| Collagen | Sigma-Aldrich | 067K2302 | ||
| Antibiotic | 10 μL/ 1 mL of medium | |||
| Scissors | Sterilized | |||
| Needle | Diameter of 0.6-1mm | |||
| Syringe | 10 – 20 mL | |||
| Physiological Saline Solution (PSS) | 20-40 mL per artery | |||
| Collagenase type I | Sigma-Aldrich | 047K1052 | 3 mL per artery | |
| Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS) | Diluted collagenase | |||
| Phosphate buffered saline solution (PBS) | Warmed to 37°C |
Riferimenti
- Van Rijen, H. Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).
- Martín de Llano, J. Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).
- Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).
- Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).
