İnsan Umblikal Arter düz kas hücrelerinin izolasyonu (HUASMC)
Summary
Göbek kordonu, farklı şekillerde düz kas hücreleri izole etmek için kullanılır. Bu çalışmada izole düz kas hücreleri için enzimatik tedavi kullanılır.
Abstract
Insan göbek kordonu (UC), doğumdan hemen sonra kolayca elde edilebilir bir biyolojik örnek. Bu biyolojik örnek, çoğu zaman atılan ve toplama doğan veya annenin sağlığı için herhangi bir ek risk anlamına gelmez. Ayrıca, hiçbir etik kaygıları artırdı. UC bir ven ve her iki endotel hücreleri (EC) iki arter tarafından bestelenmiş<sup> 1</sup> Ve düz kas hücreleri (SMC'lere)<sup> 2</sup> Kan damarlarının ana hücresel bileşenlerinin iki izole edilebilir. Bu projede SMC'lere buna göre UC arterlerin enzimatik tedavi Jaffe tarafından daha önce açıklanan deneysel işlemin sonunda elde edilen<em> Ve ark.</em<sup> 3</sup>. Hücre izolasyonu sonra DMEM-F12% 5 fetal sığır serumu ile desteklenmiş ve çeşitli pasajlar için kültüre edildi t-flash tutuldu. Hücreler farklı kuşaklardan morfolojik ve diğer fenotipik özellikleri korumuştur. Bu çalışmanın amacı konstriktör ilaçlar ile gelecekteki deneyleri için model olarak kullanmak amacıyla düz kas hücreleri izole etmek, izole etmek ve yapısal vasküler fonksiyon hücresel ve moleküler yönlerini incelemek için, L-tipi kalsiyum kanalları karakterize<sup> 4</sup> Ve doku mühendisliği onları kullanmak için.
Protocol
Discussion
SMC konstriktör ilaçlar ile gelecek deneyleri için model olarak izole etmek için kullanılan ve yapısal olarak, L-tipi kalsiyum kanalları karakterize vasküler fonksiyon hücresel ve moleküler yönlerini incelemek ve doku mühendisliği onları kullanmak için olabilir. SMC'lere ve EC, insanlarda kullanılmak üzere yarı sentetik kan damarlarının üretiminde kullanılabilir yeni Biyomalzemelerin gelişimi için esastır.
Acknowledgements
Amato Lusitano Hastanesi, Castelo Branco Portekiz.
Hastanesi Sousa Martins, Guarda Portekiz.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-F12 | Sigma-Aldrich | 095K8311 | ||
| Fetal bovine serum (FBS) | Biochrom-AG | 0117T | ||
| RPMI 1640 | Gibco | 3103806 | ||
| Collagen | Sigma-Aldrich | 067K2302 | ||
| Antibiotic | 10 μL/ 1 mL of medium | |||
| Scissors | Sterilized | |||
| Needle | Diameter of 0.6-1mm | |||
| Syringe | 10 – 20 mL | |||
| Physiological Saline Solution (PSS) | 20-40 mL per artery | |||
| Collagenase type I | Sigma-Aldrich | 047K1052 | 3 mL per artery | |
| Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS) | Diluted collagenase | |||
| Phosphate buffered saline solution (PBS) | Warmed to 37°C |
Riferimenti
- Van Rijen, H. Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).
- Martín de Llano, J. Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).
- Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).
- Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).
