الأزهار وتراجع تحويل thaliana Arabidopsis لتفحص pTSO2 : β غلوكورونيداز التعبير مراسل جين
Summary
هذه المقالة يوضح الأزهار وتراجع طريقة<em> الأجرعية المورمة</em> بوساطة تحويل<em> thaliana Arabidopsis</em>. من خلال إدخال خلية تنظيم دورة المروج ، المراسل ،<em> pTSO2 : β غلوكورونيداز (GUS)</em> ، في<em> Arabidopsis</em> ، ونحن يوضح كيف يمكن للمرء التعبير الصحفي بالكشف عن GUS في الشتلات وراثيا.
Abstract
القدرة على إدخال جينات أجنبية إلى كائن حي هو الأساس للبيولوجيا الحديثة والتكنولوجيا الحيوية. في النموذج النباتات المزهرة<em> thaliana Arabidopsis</em> ، والأزهار وتراجع التحول الأسلوب<sup> 1-2</supاستبدلت> جميع الطرق السابقة بسبب بساطته ، والكفاءة ، والتكلفة المنخفضة. على وجه التحديد ، ويطلق النار من الشباب المزهرة<em> Arabidopsis</emوانخفض> النباتات في حل<em> الأجرعية المورمة</em> تحمل يبني البلازميد محددة. بعد غمس ، يتم إرجاع النباتات للنمو الطبيعي وبذور المحصول ، ونسبة صغيرة منها تتحول مع الجين الأجنبية ويمكن اختيار لتحتوي على مضادات حيوية في المتوسط. هذا الأسلوب من الزهور وتراجع بشكل ملحوظ سهلت<em> Arabidopsis</emساهم> البحوث وإلى حد كبير في فهمنا وظيفة الجين المصنع. في هذه الدراسة ، ونحن نستخدم الزهور وتراجع طريقة لتحويل الجينات المراسل ،<em> β غلوكورونيداز (GUS)</em> ، تحت سيطرة<em> TSO2</em> المروج.<em> TSO2</em> الترميز لاختزال ريبونوكليوتيد (RNR) الوحيدات الصغيرة<sup> 3</sup> ، هو جين ينظم دورة الخلية الأساسية للdNDP الحيوي في المرحلة – S من دورة الخلية. فحص<em> GUS</em> التعبير في المعدلة وراثيا<em> Arabidopsis</em> تبين أن الشتلات<em> TSO2</emوأعرب عن> في تقسيم بنشاط الأنسجة. يمكن أن يكون الأسلوب التجريبي وذكرت ومواد تتكيف بسهولة ، ليس فقط للبحث ولكن أيضا من أجل التعليم في المدارس الثانوية والمستويات الجامعية.
Protocol
Discussion
يتم تحديد كفاءة التحول العديد من العوامل المختلفة ، التي تناقش أدناه :
- صحة النباتات وسنهم وذات أهمية قصوى. واحد تقريبا في الشهر إنتاج المصانع القديمة العديد من البراعم الزهرية غير ناضجة مثالية. وسوف يطلق النار على ال…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر تشون وانغ لبناء pTSO2 : GUS والصور في الشكل 1 ، ديتليف يجل لتقاسم بروتوكول GUS – مضمونة ، Sijacic Paja ، وكورتني Hollender للتعليقات مفيدة. ويدعم البحوث في المختبر Z. L ق من قبل مؤسسة العلوم الوطنية الأميركية (وIOB0616096 MCB0744752). معتمد جزئيا ZL من جامعة ميريلاند محطة التجربة الزراعية.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 6-benzyladenine | Sigma | 852430 | ||
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Toxic, wear gloves | ||
| Murashige and Skoog Basal medium (MS) | Sigma | M5519 | ||
| Gamborg’s vitamin solution 1000X | Sigma | G1019 | ||
| X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt | Biosynth | B-7300 | Toxic, light sensitive keep in the dark | |
| Micropore 3M Tape | Fisher | 19027761 |
Riferimenti
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).
- Wang, C., Liu, Z. Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development. Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).
