花香浸改造拟南芥检查 pTSO2：β-葡萄糖醛酸酶报告基因的表达
Summary
本文介绍了花卉浸方法<em>农杆菌</em>介导的转化<em>拟南芥</em>。通过引入一个细胞周期调节的发起人，记者，<em> pTSO2：β-葡萄糖醛酸酶（GUS）的</em>，到<em>拟南芥</em>，我们演示了如何检测到GUS基因在转基因苗记者表达。
Abstract
一个有机体，引入外源基因的能力，是现代生物学和生物技术的基础。在该模型中的开花植物<em>拟南芥</em花浸变换方法<sup> 1-2</sup>已取代所有以前的方法，因为它的简单，效率，成本低。具体来说，年轻开花的芽<em>拟南芥</em>植物的溶液浸泡<em>农杆菌</em>携带特定的质粒结构。浸渍后，植物恢复到正常的生长和产量的种子，很小的比例，其中与外源基因的转化，可以选择含抗生素的培养基上。这花香浸方法，大大地促进<em>拟南芥</em>研究大大促进了我国植物基因功能的理解。在这项研究中，我们使用花香浸法记者基因改造，<em>β-葡萄糖醛酸酶（GUS）的</em>下，控制<em> TSO2</em>推动者。<em> TSO2</em>，核苷酸还原酶（RNR）小亚基编码<sup> 3</sup>，是一个细胞周期调控基因在细胞周期S期dNDP合成的必要条件。审核<em> GUS</em>在转基因的表达<em>拟南芥</em>苗显示，<em> TSO2</em>表示积极分裂组织。报告的实验方法和材料可以很容易地适应不仅为研究，而且还对教育，在高中和大学水平。
Protocol
Discussion
转化效率是由许多不同的因素，下面讨论的：
- 植物的健康和他们的年龄是最重要的。约一个月的老厂生产大量未成熟的花芽，是理想的。修剪主芽，以鼓励中学改造前3-4天拍摄形成会增加转化效率。老厂将产生转化，但在较低的利率。
- 生育的植物是重要的。如果一个人改造与生育率下降的突变体，植物将需要更多的浸渍。
- 0.3％Silwet L – 77渗透缓冲区中的表面活性剂被认为?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢春新王建设pTSO2：：GUS和图1，德特勒夫威格尔的照片分享有益的意见的GUS万无一失的协议，帕哈Sijacic和考特尼荷伦德。 Z. L S实验室的研究是由美国国家科学基金会（IOB0616096和MCB0744752）的支持。 ZL是由美国马里兰大学农业试验站的部分支持。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 6-benzyladenine | Sigma | 852430 | ||
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Toxic, wear gloves | ||
| Murashige and Skoog Basal medium (MS) | Sigma | M5519 | ||
| Gamborg’s vitamin solution 1000X | Sigma | G1019 | ||
| X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt | Biosynth | B-7300 | Toxic, light sensitive keep in the dark | |
| Micropore 3M Tape | Fisher | 19027761 |
Riferimenti
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).
- Wang, C., Liu, Z. Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development. Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).
