Цветочные погружением Преобразование Arabidopsis thaliana, Чтобы изучить PTSO2:: β-глюкуронидазы Reporter экспрессии генов
Summary
В этой статье показано цветочно-падение метод<em> Agrobacterium tumefaciens</em> Опосредованного преобразования<em> Arabidopsis thaliana</em>. Вводя клеточного цикла регулируется промоутер-репортер,<em> PTSO2:: β-глюкуронидазы (GUS)</em>, В<em> Arabidopsis</em>, Мы иллюстрирует, как один репортер обнаруживает GUS экспрессии в трансгенных саженцев.
Abstract
Способность вводить чужеродных генов в организме является основой современной биологии и биотехнологии. В цветущих растений модель<em> Arabidopsis thaliana</em>, Цветочно-падение метода преобразования<sup> 1-2</sup> Заменила все предыдущие методы из-за своей простоты, эффективности и низкой стоимости. В частности, ростки молодых цветущих<em> Arabidopsis</em> Растения, смоченной в растворе<em> Agrobacterium tumefaciens</em> Проведение конкретных плазмиды конструкций. После погружения, растения возвращаются к нормальному росту и семян, небольшой процент, которые трансформируются с чужеродный ген и могут быть выбраны для представления в среде, содержащей антибиотики. Это цветочно-падение метод значительно облегчила<em> Arabidopsis</em> Исследования и внес большой вклад в наше понимание завод функции гена. В этом исследовании мы используем цветочно-падение метод для преобразования гена-репортера,<em> Β-глюкуронидазы (GUS)</em>, Под контролем<em> TSO2</em> Промоутер.<em> TSO2</em>, Кодирующий рибонуклеотидредуктазу (RNR) малой субъединицы<sup> 3</sup>, Является клеточный цикл регулируется геном необходимы для биосинтеза dNDP в S-фазе клеточного цикла. Рассмотрение<em> GUS</em> Экспрессии в трансгенных<em> Arabidopsis</em> Саженцев показывает, что<em> TSO2</em> Выражается в активно делящихся тканей. Сообщили экспериментальный метод и материалов может быть легко адаптирована не только для исследований, но и на обучение в средней школе и колледже уровнях.
Protocol
Discussion
Эффективность преобразования определяется многими различными факторами, которые обсуждаются ниже:
- Здоровье растений и их возраста, имеют первостепенную важность. Примерно через месяц старые заводы по производству многочисленные незрелые почки цветочные идеальны. Обрезки по?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим Chunxin Ван построения pTSO2:: GUS и для фотографий на рисунке 1, Детлеф Вайгель для обмена GUS-безопасный протокол, Paja Sijacic, и Кортни Hollender за полезные комментарии. Исследования в лаборатории З. л ы поддерживается Национальным научным фондом США (IOB0616096 и MCB0744752). ZL частично поддержана Университета штата Мэриленд сельскохозяйственной опытной станции.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 6-benzyladenine | Sigma | 852430 | ||
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Toxic, wear gloves | ||
| Murashige and Skoog Basal medium (MS) | Sigma | M5519 | ||
| Gamborg’s vitamin solution 1000X | Sigma | G1019 | ||
| X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt | Biosynth | B-7300 | Toxic, light sensitive keep in the dark | |
| Micropore 3M Tape | Fisher | 19027761 |
Riferimenti
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).
- Wang, C., Liu, Z. Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development. Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).
