마우스의 췌장 베타 세포 질량의 원위치 부량에서
Summary
다음 프로토콜은 가상 슬라이스 이미지에 대한 췌장 해부 과정을 설명하고, 전체 췌장에있는 모든 GFP – 태그 베타 세포의 후속 부량.
Abstract
건강과 질병의 특정 세포 인구의 변화를 추적하는 것은 생명 의학 연구의 중요한 목표입니다. 모니터링 췌장 베타 세포 증식과 아일릿 성장의 과정은 특히 도전이다. 우리는 ImageJ (rsb.info.nih.gov / 엘제이 /)에 대해 작성된 매크로와 형광 – 태그 베타 세포와 유전자 변형 생쥐의 췌장 손상에서 베타 세포의 분포를 캡처하는 방법을 개발했습니다. 췌장 해부 및 조직 삭제에 따라, 전체 췌장은 어떤 후 GFP – 태그 베타 세포 검사 있으며, 가상의 슬라이스로 캡처합니다. 분석 총 베타 세포 지역 아일릿 번호 및 각 아일릿과 베타 세포의 작은 클러스터에 대한 특정 매개 변수와 위치에 대한 참조와 크기 분포의 부량을 포함합니다. 아일 레츠의 전체 분포는 3 차원에 역모를, 각 아일릿의 크기와 모양에 대한 배포의 정보를 한 눈에 전체 베타 세포 분야에서 변화의 양적 및 질적 비교를 허용하실 수 있습니다.
Protocol
Discussion
손상 췌장에서 아일 레츠와 베타 세포 클러스터의 가상 슬라이스 이미지의 분석 아일 레츠의 전체 분포의 대규모보기를 제공합니다. 개발 및 시간이 지남에 따라 전체 아일릿 분포의 변화에 따라서 공부하고 비교할 수 있습니다. 이러한 예제는 췌장 아일릿 형성 (1) 우리의 분석에 증명됩니다. 여러 시간 지점 (P1 – P21)에서 신생아 쥐 pancreata의 포괄적인 분석 아일 레츠는 분열에 의해 형성되는…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
연구는에서 지원하는 미국 보건 서비스 그랜트 DK – 081527, DK – 072473 시카고 당뇨병 연구 및 교육 센터 (동물 모델 코어) 대학 및 Kovler 가족 재단에서 선물 DK – 20595.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Forceps | Miltex | |||
| Scissors | F.S.T | 14001-13 | 01n2 | |
| Scissors | F.S.T | 14072-10 | 02s5 | |
| Large glass slide | Electron Microscopy Sciences | 71862-01 | 75x51x1.2mm | |
| Large cover glass | Ted Pella, Inc | 260462 | 50x75mm | |
| Glass Slide | Fisher Scientific | 12-550-15 | 25x75x1.0mm | |
| Cover glass | Fisher Scientific | 12-458-5M | 75x25mm | |
| Cover glass | Erie Scientific | 25mm circle | ||
| Fluorescent microscope | Olympus IX-81 | |||
| Dissection microscope | Olympus SZX12 | |||
| Stereo Investigator | MicroBrightField | |||
| MIP-GFP mice | Jackson Laboratory |
Riferimenti
- Miller, K., Kim, A., Kilimnik, G., Moka, U., Jo, J., Periwal, V., Hara, M. Islet formation during the neonatal development in mice. PloS One. 4, E7739-E7739 (2009).
- Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E1331-E1338 (2009).
- Hara, M., Wang, X., Kawamura, T., Bindokas, V. P., Dizon, R. F., Alcoser, S. Y., Magnuson, M. A., Bell, G. I. Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells. Am J Physiol Endocrinol Metab. 284, E177-E183 (2003).
- Hara, M., Dizon, R. F., Glick, B. S., Lee, C. S., Kaestner, K. H., Piston, D. W., Bindokas, V. P. Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas. Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, E1041-E1047 (2006).
