In situ Quantifizierung von Pankreas-Beta-Zellmasse in Mäuse
Summary
Das folgende Protokoll beschreibt den Prozess des Pankreas dissection für virtuelle Scheibe Bildgebung, und die anschließende Quantifizierung aller GFP-markierten Beta-Zellen in der gesamten Bauchspeicheldrüse.
Abstract
Tracing Veränderungen spezifischer Zellpopulationen in Gesundheit und Krankheit ist ein wichtiges Ziel der biomedizinischen Forschung. Der Prozess der Überwachung pankreatischen Beta-Zell-Proliferation und Inselchen Wachstum ist eine besondere Herausforderung. Wir haben eine Methode, um die Verteilung von Beta-Zellen im intakten Pankreas transgener Mäuse mit Fluoreszenz-markierten beta-Zellen mit einem Makro für ImageJ (rsb.info.nih.gov / ij /) geschrieben Bildaufzeichnung entwickelt. Nach Pankreas-Dissektion und Gewebe Lichtung, wird die gesamte Bauchspeicheldrüse als virtuelle Scheibe gefangen genommen, nach denen die GFP-markierten beta-Zellen untersucht werden. Die Analyse beinhaltet die Quantifizierung von insgesamt Beta-Zell-Bereich, Inselchen Anzahl und Größenverteilung in Bezug auf bestimmte Parameter und Standorte für jede Insel und für kleine Gruppen von beta-Zellen. Die gesamte Verteilung der Inseln kann in drei Dimensionen dargestellt werden, und die Informationen aus der Verteilung auf die Größe und Form der einzelnen Insel ermöglicht eine quantitative und qualitative Vergleich der Veränderungen in insgesamt Beta-Zell-Bereich auf einen Blick.
Protocol
Discussion
Die Analyse der virtuellen Scheibe Bilder von Inselchen und Beta-Zell-Clustern im intakten Pankreas stellt eine große Aussicht auf die gesamte Verteilung der Inseln. Entwicklungen und Veränderungen in insgesamt Insel Verteilung im Laufe der Zeit können so untersucht und verglichen werden. Ein solches Beispiel ist in unserer Analyse der Inselzellen der Bauchspeicheldrüse Bildung (1) gezeigt. Eine umfassende Analyse der neugeborenen Mäusen Bauchspeicheldrüsen zu verschiedenen Zeitpunkten (P1-P21) hat gezeigt, dass k…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Studie wird unterstützt von US Public Health Service Grant DK-081527, DK-072473 und DK-20595 an die University of Chicago Diabetes Research and Training Center (Animal Models Core), und ein Geschenk der Kovler Family Foundation.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Forceps | Miltex | |||
| Scissors | F.S.T | 14001-13 | 01n2 | |
| Scissors | F.S.T | 14072-10 | 02s5 | |
| Large glass slide | Electron Microscopy Sciences | 71862-01 | 75x51x1.2mm | |
| Large cover glass | Ted Pella, Inc | 260462 | 50x75mm | |
| Glass Slide | Fisher Scientific | 12-550-15 | 25x75x1.0mm | |
| Cover glass | Fisher Scientific | 12-458-5M | 75x25mm | |
| Cover glass | Erie Scientific | 25mm circle | ||
| Fluorescent microscope | Olympus IX-81 | |||
| Dissection microscope | Olympus SZX12 | |||
| Stereo Investigator | MicroBrightField | |||
| MIP-GFP mice | Jackson Laboratory |
Riferimenti
- Miller, K., Kim, A., Kilimnik, G., Moka, U., Jo, J., Periwal, V., Hara, M. Islet formation during the neonatal development in mice. PloS One. 4, E7739-E7739 (2009).
- Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E1331-E1338 (2009).
- Hara, M., Wang, X., Kawamura, T., Bindokas, V. P., Dizon, R. F., Alcoser, S. Y., Magnuson, M. A., Bell, G. I. Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells. Am J Physiol Endocrinol Metab. 284, E177-E183 (2003).
- Hara, M., Dizon, R. F., Glick, B. S., Lee, C. S., Kaestner, K. H., Piston, D. W., Bindokas, V. P. Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas. Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, E1041-E1047 (2006).
