Embedding Voksen Drosophila Hoder i Paraffin: Forbereder vev for histologi

Abstract

Kilde: Sunderhaus, E. R., Kretzschmar, D. Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila . J. Vis. Utt. (2016).

Denne videoen beskriver hvordan du legger inn Drosophila-hoder i parafin ved hjelp av kragemetoden, en teknikk som forbereder fluehoder for seriell seksjonering. Parafinseksjoner brukes til histologiske undersøkelser av hjernens anatomi og for vurdering av nevrodegenerasjon. Den omtalte protokollen demonstrerer hvordan flere fluer kan behandles i ett preparat, og dermed øke tidseffektiviteten og minimere eksperimentelle artefakter.

Protocol

Denne protokollen er et utdrag fra Sunderhaus og Kretzschmar, Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila, J. Vis. Exp. (2016). 1. Feste hodet på krager og legge inn i parafin MERK: Alle trinnene i fikseringsprosessen skal gjøres i en avtrekkshette. Metylbenzoat, selv om det ikke utgjør en helserisiko, har en svært tydelig lukt, noe som kan være overveldende hvis…

Representative Results

Figur 1: Parafin serielle seksjoner. A) Ved hjelp av kragemetoden kan eksperimentelle og kontrollfluer behandles som en prøve ved å tre dem på en krage. Øyeløse sinus oculis fluer er satt inn for orientering (piler). B) Skjematisk som viser retningen på løpehodene i kragen. C) I dette bildet er seksjoner fra forskjellige løpehoder orientert fra venstre mo…

Materials

Collar	Genesee Scientific	TS 48-100	We are using custom made collars that are made from one piece of metal instead of layers as the ones by Genesee.
Rubber ice cube tray for embedding	Household store		The size can be made-to-fit by glueing in additional walls
Crystallizing dish	Fisher Scientific Company	08-762-3
Ether	Fisher Scientific Company	E138-1
Ethanol	Decon Laboratories Inc.	2701
Choloroform	Fisher Scientific Company	C298-500
Glacial Acetic Acid	Fisher Scientific Company	A38-212
Methylbenzoate	Fisher Scientific Company	M205-500	Distinct Odor – Use in fume hood!
Low Melting Point Paraffin Wax	Fisher Scientific Company	T565	Make sure to keep extra melted in a 65 °C waterbath