Inbäddning av vuxna Drosophila-huvuden i paraffin: Förbereda vävnad för histologi

Abstract

Källa: Sunderhaus, E. R., Kretzschmar, D. Mass Histologi för att kvantifiera neurodegeneration i Drosophila . J. Vis. Exp. (2016).

Den här videon beskriver hur man bäddar in Drosophila-huvuden i paraffin med hjälp av kragemetoden, en teknik som förbereder flughuvuden för seriell sektionering. Paraffinsektioner används för histologiska undersökningar av hjärnans anatomi och för bedömning av neurodegeneration. Det presenterade protokollet visar hur flera flugor kan bearbetas i en förberedelse, vilket ökar tidseffektiviteten och minimerar experimentella artefakter.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Sunderhaus och Kretzschmar, Mass Histology för att kvantifiera neurodegeneration i Drosophila, J. Vis. Exp. (2016). 1. Fixering av huvudet på krage och inbäddning i paraffin OBS: Alla steg i fixeringsprocessen bör göras i en rökhuv. Metylbensoat, även om det inte utgör en hälsorisk, har en mycket distinkt lukt, vilket kan vara överväld…

Representative Results

Figur 1: Paraffin seriella avsnitt. A) Med hjälp av kragemetoden kan experimentella flugor och kontrollflugor bearbetas som ett prov genom att gänga dem på en krage. Ögonlösa sinusockulisflugor sätts in för orientering (pilar). B) Schematiskt som visar flughuvudens orientering i kragen. C) I den här bilden är sektioner från olika flughuvuden orienterade…

Materials

Collar	Genesee Scientific	TS 48-100	We are using custom made collars that are made from one piece of metal instead of layers as the ones by Genesee.
Rubber ice cube tray for embedding	Household store		The size can be made-to-fit by glueing in additional walls
Crystallizing dish	Fisher Scientific Company	08-762-3
Ether	Fisher Scientific Company	E138-1
Ethanol	Decon Laboratories Inc.	2701
Choloroform	Fisher Scientific Company	C298-500
Glacial Acetic Acid	Fisher Scientific Company	A38-212
Methylbenzoate	Fisher Scientific Company	M205-500	Distinct Odor – Use in fume hood!
Low Melting Point Paraffin Wax	Fisher Scientific Company	T565	Make sure to keep extra melted in a 65 °C waterbath