Denne videoen beskriver en metode for å dissekere gonader fra voksne C. elegans hermafroditter, noe som resulterer i vev som er egnet for immunstaining og fluorescerende avbildning.
Protocol
Denne protokollen er et utdrag fra Gervaise og Arur, Spatial og Temporal Analyse av Active ERK i C. elegans Germline. J. Vis. Utt. (2016). 1. Disseksjon av voksne ormer for å skaffe gonader Velg 100 – 150 WT (N2) eller ønsket genotype av ormer på ønsket og spesifikk utviklingsstadium (L1, L2, L3, L4, voksen, etc.) i 100…
Materials
Flat bottom glass watch dish
Agar Scientific
AGL4161
We use glass because dissected gonads often stick to plastic
25 G needles
BD PrecisionGlide
305122
Syringes (could be 1 or 5 mL)
BD Syringes
1 mL: BD 309659
Microscope slides (25 x 75 x 1.0 mm)
Fisherbrand
12-550-343
Clinical bench top centrifuge
*M9 solution
Levamisole
Sigma
L9756
*M9 Buffer Recipe
3 g KH2PO4, 6 g Na2HPO4, 5 g NaCl, 1 mL 1 M MgSO4, H2O to 1 L.