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Articolo metodologico

Saggio dell'olfattometro a quattro vie: un metodo per valutare le risposte degli odori in Drosophila

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30 aprile 2023

In questo articolo

Abstract

Fonte: Lin, C.C., et al. Comportamenti olfattivi analizzati dal monitoraggio computerizzato della Drosophila in un olfattometro a quattro quadranti. J. Vis. Exp. (2016).

I moscerini della frutta hanno un sistema olfattivo complesso, possono discriminare centinaia di odori e usano il loro senso dell'olfatto per indirizzare le decisioni comportamentali. Questo video descrive il test dell'olfattometro a quattro vie, un metodo per studiare le risposte comportamentali olfattive nei moscerini. La clip del protocollo in primo piano mostra come gestire le mosche di prova e quali sono i passaggi critici durante l'esecuzione del test.

Protocollo

Questo protocollo è un estratto da Lin et al., Comportamenti olfattivi analizzati dal monitoraggio computerizzato della Drosophila in un olfattometro a quattro quadranti, J. Vis. Exp. (2016).

1. Risposte comportamentali agli odori attraenti e repellenti

  1. Accendere il termoregolatore e impostarlo a 25 °C.
  2. Collegare le camere degli odori (controllo e test degli odorizzanti) inserendo il tubo all'uscita della camera degli odori e al raccordo a pressione sulla scatola di comportamento.
  3. Controllare la portata in ciascun quadrante utilizzando il flussometro per assicurarsi che i flussi d'a....

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Risultati

figure-results-1
Figura 1: Esempio di dati generati utilizzando un saggio olfattivo a quattro campi. (A) Schema dell'arena a quattro campi. (B) Le risposte neutre si osservano quando tutti e quattro i quadranti contengono solo perfusione di aria secca. (C) Risposte di attrazione a una diluizione del 6,25% dell'aceto di sidro di mele perfuso dal quadrante superiore sinistro. (D

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Sistema di erogazione dell'aria(Quantità necessaria)
Tubi e connettori
Collettori termoplastici NPT(F)Cole-Parmer, IL, Stati UnitiR-31522-311
Nipplo riduttore esagonale (1/4MNPT->1/8MNPT)McMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice: 5232T3141
Tubi (ID:1/8)McMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice: 5108K4350 piedi
Tubi (ID:1/16)McMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice: 52355K41100 piedi
Raccordi per tubi spinatiMcMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice: 5117K711 confezione
Raccordi per tubi push-to-connectMcMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice: 5779K1024
Raccordi per tubi spinati (1/4MNPT->1/8BF)McMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice: 5463K4391 confezione (10)
Raccordi per tubi spinati (1/8MNPT->1/8BF)McMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice: 5463K438Confezione da 2 (10)
Raccordi per tubi spinati (1/8MNPT->1/16BF)McMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice: 5463K4Confezione da 2 (10)
Raccordi per tubi spinati (1/4MNPT->1/4BF)McMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice: 5670K841
Tappo a testa esagonaleMcMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice 48335K1521
Regolatore di pressione dell'aria, filtro dell'aria e flussometri(Quantità necessaria)
Unità di essiccazione di gas di laboratorioW A HAMMOND DRIERITE CO LTD, OH, STATI UNITIModello: L68-NP-303; stock #268401
Telai multitubo per tubi di flusso da 150 mmCole-Parmer, IL, Stati UnitiR03215-301
Telai multitubo per tubi di flusso da 150 mmCole-Parmer, IL, Stati UnitiR03215-761
Tubi di flusso da 150 mmCole-Parmer, IL, Stati UnitiR-03217-159
Cartuccia della valvolaCole-Parmer, IL, Stati UnitiR-03218-729
Regolatore d'aria di precisioneMcMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice 6162K131
Valvole SoleniodAutomate Scientific, Berkeley, CA02-10i4
Controllore dell'elettrovalvolaValveLink 8.2, Automate Scientific, Berkeley, CA18-gennaio1
Contalitri elettronicoHoneywellAWM3100V1
DAQ (NI USB-6009, National Instruments) e unStrumenti nazionaliNI USB-60091
alimentatoreStrumenti ExtechTelefono 3822001
Camere degli odori
Barattolo in polipropilene a bocca larga 2 oz; 60 mlNalgeneCodice: 562118-0002Ne sono necessari almeno 5 per esperimento, ma è necessaria una camera separata per ogni diluizione di ciascun odorante. Disponibile presso Container Store, parte #635114)
Camera degli odori in vetro, 0.25 ozBottiglia SunburstLB4BSono necessari almeno 5 per esperimento
Valvola "In" per camera odoriSmart Products, Inc., CA, Stati UnitiCodice 214224PB-0011S000-40741 di queste parti viene utilizzata per camera degli odori, ma devono essere sostituite frequentemente
Valvola "Out" per camera odoriSmart Products, Inc., CA, Stati UnitiCodice 224214PB-0011S000-40741 di queste parti viene utilizzata per camera degli odori, ma devono essere sostituite frequentemente
Anello circolareRT Dygert International, MN, Stati UnitiAS568-029 Buna-N O-R1 confezione (100)
Vola nell'arena, nella telecamera e nelle scatole di comportamento(Quantità necessaria)
Comportamento e materiale della scatola della fotocameraPlastica interstatale, CA, Stati UnitiABS nero estruso (https://www.interstateplastics.com/Abs-Black-Extruded-Sheet-ABSBE~~ST.php)1803 pollici quadrati
Teflon per arena di mosca e inserti per camere degli odori, spessore 3/8", 12" x 12"McMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice 8545K271
Lastre di vetro, 1/8" di spessore, 9" x 9"McMaster-Carr, IL, Stati UnitiCodice 8476K191numero arabo
Controllore termoelettrico a doppia azioneWAtronix Inc, CA, Stati UnitiDA12V-K-01
Array di LED IRIlluminazione avanzata, Rochester, VT, Stati UnitiAL4554-88024, PS24-TL2 array di LED e un alimentatore
Condizionatore d'ariaNegozio MelcorMAA280T-121
Sistema di imaging(Quantità necessaria)
Obiettivo Cosmicar/Pentax C21211TH (12.5 mm f/1.4) C-mountB AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, STATI UNITIPEC21211 KP1
Cavo di interconnessione CCXC-12P05NB AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, STATI UNITISOCCXC12P05N1
Adattatore per fotocamera DC-700B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, STATI UNITISODC7001
Filtro IR B+W 40,5 093B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, STATI UNITICodice 65-0724421
TiFFEN 40,5 mm Polarizzatore circolareamazzone1
Telecamera IRSorgente di visione industriale, FL, Stati UnitiSony XC-EI50 (SY-XC-E150)1
Convertitore video USBLa fonte di imaging, Carolina del Nord, Stati UnitiDFG/USB2-It1
iFlySpy2 (software di tracciamento delle mosche)Julian Brown, Stanford, California: julianrbrown@gmail.comiFlySpy21
Software di acquisizione ICLa fonte di imaging, Carolina del Nord, Stati Uniti(http://www.theimagingsource.com/)
misto(Quantità necessaria)
Utensile rotante DremelDremel, Racine, WI, Stati UnitiDremel 8000-031
Punte diamantate per il taglio del vetroDisponibile presso vari fornitori; MSC fornitura industriale Co, Melville, NY906063281

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