Fonte: Sangaletti, R. e Bianchi, L. Un metodo per la coltura di cellule embrionali di C. elegans.J. Vis. Exp.(2013).
Questo video introduce un metodo per isolare e coltivare sterili cellule embrionali di C. elegans in vitro.
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Articolo metodologico
Digestione enzimatica e dissociazione manuale: un metodo per preparare gli embrioni di C. elegans per la coltura cellulare
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30 aprile 2023
In questo articolo
Abstract
Protocollo
1. Dissociazione delle cellule embrionali
- Condurre le fasi successive della procedura in condizioni sterili utilizzando una cappa a flusso laminare. Mentre gli animali sono vestiti su piastre batteriche, i lavaggi e il trattamento con la soluzione di lisi contenente candeggina dovrebbero eliminare la maggior parte, se non tutti, i batteri. Pertanto, l'utilizzo di una cappa laminare a questo punto della procedura impedisce una nuova contaminazione della sospensione dell'uovo.
- Risospendere gli ovuli pellettati in 1 ml di chitinasi 2 mg/ml (riserva in tampone uovo pH 6,5) e trasferirli in una nuova provetta conica sterile da 15 ml. ....
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Risultati
Figura 1. Embrioni di C. elegans prima e dopo il trattamento con chitinasi. (A) Fotografia delle uova prima dell'esposizione alla chitinasi. La freccia indica il guscio d'uovo trasparente e intatto che circonda un embrione. (B) Uova trattate con chitinasi per 10 minuti. I gusci d'uovo sono stati digeriti e non sono più visibili intorno agli emb.......
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| REAGENTI | |||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | Codice 11415-064 | |
| Siero Fetale Bovino | Invitrogen | Codice 16140-063 | |
| Penicillina-streptomicina | sigma | P4333-100ML | |
| Chitinasi da Streptomyces Griseus | sigma | C6137-25UN | |
| Lectina di arachidi | sigma | L0881-10MG | |
| >ATTREZZATURA | |||
| 101-1000 μl di punte per pipette graduate blu | USA Scentific | Codice 1111-2821 | |
| 10 ml Pipetta Sterilizzata Incartata Singolarmente | USA Scentific | Codice 1071-0810 | |
| Pipettatore ergonomico a volume variabile (100-1000 μl) con espulsore di puntali | VWR International Inc. | 89079-974 | |
| Ausilio portatile per pipette, Drummond | VWR International Inc. | Codice 53498-103 | |
| Transfer Pipetta in Plastica Sterile | VWR International Inc. | Codice 14670-114 | |
| 15 ml Tubo Conico | USA Scentific | Anni 1475-1611 | |
| Aghi sterili calibro 18 | Becton, Dickinson e Co. | 305196 | |
| Siringhe sterili da 10 ml | Becton, Dickinson e Co. | 305482 | |
| Filtri per siringhe in plastica Corning 0,20 μm dimensione dei pori | Corning | 431224 | |
| Filtro per siringa acrodico da 25 mm con membrana versapor da 5 μm | VWR International Inc. | Codice 28144-095 | |
| 60x15 mm Piastra di Petri Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 | |
| 100x15 mm Piastra di Petri sterile | VWR International Inc. | 82050-912 | |
| 12 mm Diametri Vetrini Coprioggetti | VWR International Inc. | 48300-560 | |
| Piastre per colture cellulari trasparenti Fondo piatto a 24 pozzetti con coperchio | Thomas scientifico | Codice 6902A09 | |
| Dumont #5- Pinze Fini | Strumenti per la scienza | Codice 11254-20 | |
| Centrifuga 5702 | Eppendorf | 22629883 | |
| Cappa a Flusso Laminare | |||
| Microscopio invertito con obiettivo x10 | |||
| Incubatrice umidificata ad aria ambiente |
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