Digestión enzimática y disociación manual: un método para preparar embriones C. elegans para el cultivo celular

Abstract

Fuente: Sangaletti, R. y Bianchi, L. Un método para la cultectación de células embrionarias C. elegans. J. Vis. (2013). 

Este video introduce un método para aislar y cultivar estérilmente células embrionarias C. elegans in vitro.

Protocol

1. Disociación de células embrionarias Realice los siguientes pasos del procedimiento en condiciones estériles utilizando una campana de flujo laminar. Mientras que los animales están vestidos en placas de bacterias, los lavados y el tratamiento con la solución de lisis que contiene lejía deben eliminar la mayoría si no todas las bacterias. Por lo tanto, el uso de una capucha laminar en este punto del procedimiento evita una nueva contaminación de la suspensión del huevo. Res…

Representative Results

Figura 1. C. embriones elegans antes y después del tratamiento con quitosa. (A) Fotografía de óvulos antes de la exposición a la quitosa. La flecha apunta a la cáscara de huevo transparente e intacta que rodea un embrión. (B) Huevos tratados con quitosa durante 10 min. Las cáscaras de huevo han sido digeridas y ya no son visibles alrede…

Materials

REAGENTS
Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid	Invitrogen	11415-064
Fetal Bovine Serum	Invitrogen	16140-063
Penicillin-streptomycin	Sigma	P4333-100ML
Chitinase from Streptomyces Griseus	Sigma	C6137-25UN
Peanut Lectin	Sigma	L0881-10MG
EQUIPMENT
101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips	USA Scentific	1111-2821
10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped	USA Scentific	1071-0810
Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector	VWR International Inc.	89079-974
Portable Pipet Aid, Drummond	VWR International Inc.	53498-103
Transfer Plastic Pipet Sterile	VWR International Inc.	14670-114
15 ml Conical Tube	USA Scentific	1475-1611
Sterile 18 gauge Needles	Becton, Dickinson and Co.	305196
Sterile 10 ml Syringes	Becton, Dickinson and Co.	305482
Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size	Corning	431224
Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane	VWR International Inc.	28144-095
60×15 mm Petri Dish Sterile	VWR International Inc.	82050-548
100×15 mm Petri Dish Sterile	VWR International Inc.	82050-912
12 mm Diameter Glass Coverslips	VWR International Inc.	48300-560
Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid	Thomas scientific	6902A09
Dumont #5- Fine Forceps	Fine Science Tools	11254-20
Centrifuge 5702	Eppendorf	22629883
Laminar Flow Hood
Inverted Microscope with x10 objective
Ambient air humidified Incubator