FITC-Dextran-utfodring: En metod för att kvantifiera tarmpermeabilitet i C. elegans

Abstract

Källa: Le, T.A. N., et al. Mäta effekterna av bakterier och kemikalier på tarmpermeabiliteten hos Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019). 

Denna video introducerar en metod för att visualisera och mäta integriteten hos C. elegans tarm lumen genom att mata maskar FITC-märkta dextran.  Exempelprotokollet visar analysen med 3,3′-diindolylmethane (DIM)-behandlade och patogenmatade maskar.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Le et al, Mäta effekterna av bakterier och kemikalier på intestinal permeabilitet av Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). Beredning av NGM-plattor för testning av effekterna av en kemikalie (DIM) på C. elegans …

Representative Results

Figur 1: Effekten av DIM på tarmpermeabiliteten hos C. elegans fed P. aeruginosa. Mikroskopibilder av maskar från(A) E. coli OP50 utan FITC-dextranmatning,(B) E. coli med FITC-dextranmatning,(C) P. aeruginosa PAO1 med FITC-dextranmatning …

Materials

3,3’-diindolylmethane	Sigma	D9568
90×15 mm Petri dishes	SPL Life Sciences, South Korea	10090
Bactor Agar	Beckton Dickinson	REF. 214010
Formaldehyde solution	Sigma	F1635
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Cholesterol	Sigma	C3045
Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene	Corning Incorporated	REF. 3631
Dimethyl sulfoxide	Sigma	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Fluorescein isothiocyanate – dextran	Sigma	FD10S
Harmony software	PerkinElmer		verson 3.5
Magnesium sulfate heptahydrate	Fisher Bioreagents	BP2213-1
Fluoromount aqueous mounting medium	Sigma	F4680
Operetta CLS High-Content Analysis System	PerkinElmer	HH16000000
Peptone	Merck	EMD 1.07213.1000
Pseudomonas aeruginosa PA01	Korean Collection for Type Culture	KCTC NO. 1637
Sodium Chloride	Fisher Bioreagents	BP358-1
Stereo Microscope	Nikon, Japan	SMZ800N