마이 그 레이션의 인간 T 림프구 분리, 문화 및 분석 체외에서</em
Summary
T 림프구 마이 그 레이션 림프 기관, vasculature에서 출구로 유도하는 동안 발생하고, 주변 조직을 체결. 여기, 우리는 T 림프구 마이 그 레이션을 분석하는 데 사용할 수있는 프로토콜을 설명<em> 체외에서</em>.
Abstract
T lymphocytes의 마이 그 레이션은 다른 세포 또는 세포외 기질 단백질로 표현 리간드와 함께 세포 표면 integrins의 접착제 상호 작용을 포함한다. 낮은 친화 상태에서 세포 첨단에 높은 친화력 상태로 integrins의 정확한 spatiotemporal 활성화 T 림프구 마이 그 레이션에 대한 중요<sup> 1</sup>. 마찬가지로, 세포 후행 가장자리의 철회는, 또는 uropod, 영구적인 인테 종속적인 T 림프구의의 운동성을 유지하는 데 필요한 단계입니다<sup> 2</sup>. 수단으로 면역 또는 염증 질환 대상 integrins 많은 치료 방법은 leukocytes의 과도한 모집 및 마이 그 레이션을 억제하기 위해<sup> 3</sup>. 인간의 T 림프구의 마이 그 레이션을 조절 분자 이벤트를 연구하기 위해, 우리는를 활용해야<em> 체외에서</emT 림프구는 vasculature에서 모집하는 동안 발생하는 환경을 모방 2 차원 기판의 셀 마이 그 레이션을 분석> 시스템. T의 lymphocytes 먼저 인간의 기증자로부터 격리되고 나서 자극을 7 일에서 열흘 동안 양식입니다. 분석하는 동안, T의 lymphocytes는 세포 유착 분자 -1 (ICAM – 1), 인테 LFA – 1에 대한 리간드와 stromal 세포 – 파생 요소 – 1 (SDF – 1) 코팅 기판에 준수 및 마이 그 레이션하는 허용됩니다. 우리의 데이터는 T lymphocytes는 ~ 15 μm의 / 분 철새 속도를 전시 것을 보여줍니다. T 림프구 마이 그 레이션은 인테 그린의 봉쇄에 의해 저해 수 있습니다<sup> 1</sup> 또는 세포 actomyosin 기계 억제제에 의해 그 세포 마이 그 레이션을 조절<sup> 2</sup>.
Protocol
Discussion
본 실험에서는, 우리는 기본 인간 T의 lymphocytes의 운동성를 분석하는 간단한 시스템에 대한 자세한 내용을 제공합니다. 체외 마이 그 레이션 assays 다양한 세포 유형의 운동에 관련된 다양한 분자와 신호 경로의 역할을 해부하다하는 데 사용되었습니다. 우리 프로토콜에서 자신의 실험을 설계할 때 염두에 두어야하는 몇 가지 중요한 컨트롤은 다음과 같습니다 : 1) 소 혈청 알부민 (BSA)…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 프로젝트는 국민 건강 기금 HL087088 (MK)의 연구소와 HL18208 (MK)에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RPMI 1640 | Gibco | 11875 | ||
| FBS | Thermo Scientific | SH300070.03 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| 1-Step Polymorphs | Accurate Chemical | AN221725 | ||
| PHA | Remel/Fisher Scientific | R30852801 | ||
| Rec. human IL-2 | R&D Systems | 202-IL | ||
| Rec. human IL-15 | R&D Systems | 247-IL | ||
| Protein G | Sigma Aldrich | 19459 | ||
| Rec. human ICAM-1/Fc | R&D Systems | 720-IC | ||
| Rec. human SDF-1 | R&D Systems | 350-NS |
Riferimenti
- Hyun, Y. M., Chung, H. L., McGrath, J. L., Waugh, R. E., Kim, M. Activated integrin VLA-4 localizes to the lamellipodia and mediates t cell migration on VCAM-1. J Immunol. 183, 359-369 (2009).
- Morin, N. A., Oakes, P. W., Hyun, Y. M., Lee, D., Chin, Y. E., King, M. R., Springer, T. A., Shimaoka, M., Tang, J. X., Reichner, J. S., Kim, M. Nonmuscle myosin heavy chain IIA mediates integrin LFA-1 de-adhesion during T lymphocyte migration. The Journal of experimental medicine. 205, 195-205 (2008).
- Hyun, Y. M., Lefort, C. T., Kim, M. Leukocyte integrins and their ligand interactions. Immunologic research. , (2009).
