機械的解離:組織から生存細胞を得る方法

Abstract

出典:Garaud ら.,浸 潤性リンパ球の分析のために新鮮なヒト組織を非酵素的に解き明かす単純かつ迅速なプロトコル。 J. ヴィス・エクス (2014).

このビデオでは、生き生き細胞を得るために新鮮なヒト組織の非酵素的解離について説明します。この技術は、様々な正常および悪性ヒト組織に存在するCD45陽性細胞(リンパ球/白血球)の定性的および定量的分析に使用される。

Protocol

1. 組織ホモジネートの調製 切除された組織(手術室から切除された悪性および正常な組織)は、即時ピックアップのための訓練を受けた人員によって病理学の実験室にある。腫瘍、NANT(可能な限り腫瘍から最も遠い距離を取った)および正常な組織断片は、ヒト組織の標準的な生体安全手順を使用してBSL2実験室で外科的切除の1〜3時間以内に日常的に処理される。図1に、プロ…

Representative Results

図 1: プロトコルのフローチャート新鮮なヒト組織を処理するための我々の手順と、その後、ヒト組織に浸潤するリンパ球を評価するために使用できるいくつかの分析アプローチが示されている。 図2:H&E染色された乳房腫瘍組織?…

Materials

GentleMacs Dissociator	Miltenyi Biotec	130-093-235	BD Medimachine is somewhat equivalent
Centrifuge 5810 R	Eppendorf		or other standard table top centrifuge
Centrifuge 5417 R	Eppendorf		or other standard microcentrifuge
Esco Class II A2 Biosafety Cabinet	ESCO global		or other standard BSL2 hood
Inverted Microscope	Nikon eclipse TS100		or other microscope compatible for a hemacytometer
Bürker Chamber Marienfield		640210	or other standard hemacytometer
Navios Flow Cytometer	Beckman Coulter		or other flow cytometer (8-10 color recommended)
GentleMacs C-Tube	Miltenyi Biotec	130-096-344	BD Medimachine uses Filcon
Cell Culture Dish	Sarstedt	72,710	or other non-pyrogenic plasticware
Disposable Scalpel	Swann-Morton	510	or standard single use sterile scalpel
BD Cell Strainer 40 µm	Becton Dickinson	734-0002	or other non-pyrogenic plasticware
BD Falcon Tube 50 ml	Becton Dickinson	352070	or other non-pyrogenic plasticware
BD Falcon Tube 15 ml	Becton Dickinson	352097	or other non-pyrogenic plasticware
BD FACS Tube 5 ml	Becton Dickinson	352008	or other non-pyrogenic plasticware
Sterile Pasteur Pipette 5 ml	VWR	612-1685	or other non-pyrogenic plasticware
Microfuge Tube 1.5 ml	Eppendorf	7805-00	or other non-pyrogenic plasticware
X-Vivo 20	Lonza	BE04-448Q	serum-free medium recommended
Phosphate buffered saline	Lonza	BE17-516F	standard physiological PBS
Trypan blue	VWR	17942E	or other vital stain