Saggio di immunofluorescenza CTC: una tecnica per caratterizzare le cellule tumorali circolanti

Abstract

Fonte: Garcia, J., et al. Caratterizzazione semi-automatica PD-L1 ed enumerazione di cellule tumorali circolanti da pazienti con carcinoma polmonare non a piccole cellule mediante immunofluorescenza.J. Vis. Exp.(2019)

Questo video descrive il test di immunofluorescenza delle cellule tumorali circolanti (CTC), una tecnica per caratterizzare i biomarcatori sulle cellule tumorali circolanti in campioni di pazienti con carcinoma polmonare non a piccole cellule. Questo test potrebbe essere utilizzato per monitorare i cambiamenti dinamici del tumore e la risposta immunitaria, che possono riflettere la risposta alla chemioterapia, alle radiazioni e ai possibili trattamenti immunoterapici.

Protocol

1. Colorazione in immunofluorescenza

1. Enumerare su un vetrino a camera con una griglia di tipo emocitometrico il numero di cellule per mL. Diluire il campione arricchito con una soluzione antilegante allo 0,2% (Tabella dei materiali) a una concentrazione che raggiunga 100.000 cellule/100 μl per citospin.
2. Inumidire il contorno della camera del campione utilizzando cotone (Tabella dei materiali) con 50 μl di soluzione antilegante allo 0,2%. Posizionare un vetrino in polilisina nella camera del campione e chiudere.
3. Rivestire un puntale con una soluzione antilegante allo 0,2% pipettando su e giù 3 volte. Ris....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Pluronic F-68 10%	Gibco	Codice 24040-032	Soluzione anti-legante. Condizioni di conservazione: Temperatura ambiente
EZ Cytofunnels	ThermoFisher	A78710003	Camera di campionamento con cotone. Condizioni di conservazione: Temperatura ambiente
Centrifuga Shandon Cytopsin4	ThermoFisher	A78300003	Centrifuga dedicata. Condizioni di conservazione: Temperatura ambiente
Paraformaldeide 16%	ThermoFisher	11490570	Soluzione di fissaggio. Condizioni di conservazione: +4°C
Soluzione salina tamponata con fosfato Grado Ultra Puro 1X - 1L	1° Laboratorio di Base	BUF-2040-1X1L	Condizioni di conservazione: Temperatura ambiente
Agente bloccante FcR	Miltenyi Biotec	Codice 130-059-901	Condizioni di conservazione: +4°C
Anticorpo monoclonale PD-L1 (clone 29E2A3) - Ficoeritrina	BioLeggenda	BLE329706	Condizioni di conservazione: +4°C
Anticorpo monoclonale PanCK (clone AE1/AE3) Alexa Fluor 488	ThermoFisher	Codice: 53-9003-80	Condizioni di conservazione: +4°C
Anticorpo monoclonale CD45 (clone HI30) Alexa Fluor 647	BioLeggenda	BLE304020	Condizioni di conservazione: +4°C
Montaggio fluoro	sigma	F4680	Soluzione di montaggio. Condizioni di conservazione: Temperatura ambiente
Petri	Dutscher	Codice 632180	Condizioni di conservazione: Temperatura ambiente
Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)	Ozyme	BE17-512F	Condizioni di conservazione: +4°C
Vetrini in polilisina	ThermoFisher	J2800AMNZ	Condizioni di conservazione: Temperatura ambiente
Isolatore al silicio	Bio-Laboratori Grace	Codice 664270	Condizioni di conservazione: Temperatura ambiente
Acqua deionizzata sterile – 100 mL	1° Laboratorio di Base	CUS-4100-100ml	Condizioni di conservazione: Temperatura ambiente
Siero fetale di vitello (FCS)	Gibco	Codice 10270-106	Condizioni di conservazione: +4°C