Colorazione immunofluorescente di sferoidi: una tecnica per analizzare gli sferoidi per l'espressione dell'espressione intra ed extracellulare dell'antigene

In questo articolo

Abstract

Fonte: Cavaco, A. C. M. et al. Un modello sferoidale 3D come sistema più fisiologico per studi in vitro sulla differenziazione e l'invasione dei fibroblasti associati al cancro. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive la tecnica di colorazione immunofluorescente degli sferoidi per comprendere la differenziazione dei fibroblasti o CAF. Questo protocollo aiuta a rilevare l'espressione di antigeni intra ed extracellulari, compresa la deposizione di proteine ECM all'interno degli sferoidi.

Protocollo

1. Colorazione immunofluorescente di sferoidi

Raccogliere gli sferoidi dopo circa 24 ore in una provetta di reazione da 1,5 mL per condizione sperimentale o per proteina da analizzare. Ad esempio, posizionare gli sferoidi degli iNF stimolati con TGF-β1 in una provetta diversa dagli iNF di controllo, che non sono stati trattati. Per evitare la rottura degli sferoidi a causa di forze di taglio troppo forti, tagliare l'estremità della punta della pipetta per allargare l'orifizio. Includere almeno 5-10 sferoidi in una provetta di reazione, per consentire le repliche e tenere conto delle possibili perdite durante le fasi di lavaggio.
Centrifugare gli ....

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Risultati

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Figura 1. Passaggi sequenziali per la quantificazione della colorazione immunofluorescente di una proteina di interesse negli sferoidi, utilizzando ImageJ. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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