कृन्तकों से प्राथमिक वयस्क fibroblast संस्कृतियों की स्थापना

Summary

इस लेख अलगाव और त्वचा और जंगली कृन्तकों के फेफड़े के ऊतकों से प्राथमिक fibroblast संस्कृतियों के रखरखाव के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करता है.

Abstract

जैविक अध्ययन के लिए प्राथमिक कोशिकाओं के बजाय कैंसर कोशिका लाइनों का उपयोग करने के महत्व को व्यापक रूप से मान्यता प्राप्त हो रहा है. प्राथमिक कोशिकाओं कोशिका चक्र नियंत्रण, apoptosis के अध्ययन में पसंद कर रहे हैं, और डीएनए की मरम्मत, कैंसर की कोशिकाओं के रूप में इन प्रक्रियाओं में शामिल जीनों में परिवर्तन ले. प्राथमिक कोशिकाओं replicative senescence या aneuploidization की शुरुआत के कारण अनिश्चित काल के सभ्य नहीं कर सकते हैं. इसलिए, नए संस्कृतियों के लिए नियमित रूप से स्थापित करने की आवश्यकता है. कृंतक भ्रूण fibroblasts के अलगाव की प्रक्रिया को अच्छी तरह से स्थापित है, लेकिन अक्सर एक चुनौती प्रस्तुत वयस्क fibroblast संस्कृतियों अलग. वयस्क कृंतक मानव रोग के माउस मॉडल से अलग fibroblasts एक पसंदीदा नियंत्रण हो सकता है जब उन्हें मानव रोगियों से fibroblasts की तुलना कर सकते हैं. इसके अलावा, वयस्क fibroblasts केवल उपलब्ध सामग्री जब जंगली कृन्तकों जहां गर्भवती महिलाओं को आसानी से नहीं प्राप्त कर सकते हैं के साथ काम कर रहे हैं. यहाँ हम अलगाव और कृंतक त्वचा और फेफड़ों से वयस्क fibroblasts की संस्कृति के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं. हम इस प्रक्रिया को सफलतापूर्वक इस्तेमाल बीस कृंतक प्रजातियों भर से fibroblasts प्रयोगशाला चूहों और चूहों से Beaver, साही, गिलहरी और जैसे जंगली कृन्तकों को अलग.

Protocol

1. शुरू करने से पहले 70% इथेनॉल के साथ कैंची और संदंश जीवाणुरहित. 30 एमएल बीकर अंदर छोटे चुंबकीय उत्तेजक प्लेस, पन्नी की दो परतों, और आटोक्लेव के साथ कवर. बाँझ पानी में एक 28 Wunsch इकाइयों / एमएल Liberase Blendzyme 3 …

Discussion

सामान्य प्राथमिक fibroblasts जैविक अनुसंधान के क्षेत्र में स्थापित कैंसर कोशिका लाइनों के लिए एक बढ़िया विकल्प प्रदान करते हैं. Fibroblasts की एक महत्वपूर्ण लाभ यह है कि वे परिवर्तन ओंकोजीन और ट्यूमर शामक में नहीं ?…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM/F12 media		Invitrogen	11330-032
Fetal Bovine Serum (FBS), Qualified		Invitrogen	01437-036	The Qualified serum had been pre-tested to provide good growth support for primary fibroblasts.
Antibiotic/Antimycotic		Invitrogen	15420-096
Penicillin/Streptomycin		Invitrogen	15140-122
Liberase TM Research Grade		Roche	05401127001	Replacement enzyme.
				A note from the authors: Since Roche discontinued Liberase Blendzyme 3 (11814184001), they recommend using Liberase TM Research Grade medium Thermolysin (Cat. no. 05401119001 – 10 mg, Cat. no. 05401127001 – 100mg) instead. We have switched to this enzyme successfully with no issues.
EMEM media		ATCC	30-203	The EMEM media from ATCC already contains nonessential amino acids and sodium pyruvate.
Feathered #21 disposable, sterile scalpel		Multiple suppliers
Three Gas Control incubator		Forma or Heraeus