特定の細胞へのヒトES細胞の監督分化、再生医療に大きな関心を生成しています。我々は決定するための簡潔な、ステップバイステップのプロトコルを提供する<em> in vivoで</em細胞ベースの治療のために組織特異的な試薬を特徴付けるための有用なツールを提供する選択されたヒトES細胞の>運命。
ヒト胚性幹細胞(ヒトES)は、自己複製のための無制限の容量、および3つのすべての胚性生殖層(1)に由来する細胞に分化する能力を持っている。特定の細胞型へのヒトESの指示分化、再生医療(例えば、(2-5))、及び決定するための方法の分野で大きな関心を生成しています<em> in vivoで</em選択または操作ヒトES細胞の>運命は、この努力に不可欠です。我々はこの目的のために非常に効率的テラトーマ形成アッセイを適応している。特に選択されたヒトES細胞の少数は、細胞ペレットを形成するために未分化野生型のヒトESおよびインゲンマメのレクチンと混合される。これは、免疫不全マウスの腎被膜下にグラフトされています。 2.5 × 10のようにいくつかの<sup> 5</sup>ヒトES細胞は、16センチメートルを形成するために必要とされる<sup> 3</sup8-12週以内>奇形腫。最初に選択したヒトES細胞の運命は、免疫組織化学により決定することができる。このメソッドは、セルベースの治療のために組織特異的な試薬を特徴付けるための貴重なツールを提供しています。
我々は、 生体内環境でのヒトES細胞の分化運命をマッピングするの目的のために非常に効率的テラトーマ形成アッセイを適応している。特に選択されたヒトES細胞の少数は、細胞ペレットを形成するために未分化野生型のヒトESおよびインゲンマメのレクチンと混合される。これは、免疫不全マウスの腎被膜下にグラフトされています。最初に選択したヒトES細胞の運命は、そして、以前に(9)報告、( 図5)免疫組織化学により決定することができる。このメソッドは、セルベースの治療のための組織特異的な試薬を識別し、生成するための貴重なツールを提供しています。
The authors have nothing to disclose.
この作品は、再生医療のためのカリフォルニア工科大学(RC1 – 00104)、NHLBIから公衆衛生サービスグラント(HL085377)、およびHSBへポリン財団からの贈り物から包括的な研究助成金によってサポートされていました
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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2-Methyl-2-butanol | Sigma-Aldrich | 240486 | Avertin | |
2,2,2-Tribromoethanol | Sigma-Aldrich | T48402 | Avertin | |
4-0 silk sutures | Ethicon | 641G | ||
bFGF | R&D Systems | 233FB | ||
Buprenorphine | Sigma-Aldrich | B7536 | ||
Clear-Rite 3 | Fisher | 22-046-341 | ||
Collagenase IV | Sigma-Aldrich | C5138 | ||
D-MEM | Invitrogen | 11965 | ||
DPBS | Invitrogen | 14190 | ||
Dupont #5 forceps | WPI | 500233 | Kidney capsule | |
Eosin Y | Fisher | 23-245-658 | ||
Fetal Bovine Serum (Qualified) | Invitrogen | 26140-079 | ||
Flex alcohol | Fisher | 22-046344 | ||
Gill’s Hematoxylin #3 | Fisher | 22-050-204 | ||
Hemostat, straight | WPI | 501241 | General surgery | |
Iris forceps | WPI | 15914 | General surgery | |
Ketoprofen | Sigma-Aldrich | K2012 | ||
KnockOut D-MEM | Invitrogen | 10829 | ||
KnockOut Serum Replacement | Invitrogen | 10828-028 | ||
L-glutamine | Invitrogen | 25020-081 | ||
MILLICELL inserts | Millipore | PICM01250 | ||
Nonessential Amino Acids | Invitrogen | 11140-050 | ||
Operating scissors | WPI | 501754 | General surgery | |
Paraffin (TissuePrep) | Fisher | 8002-74-02 | ||
Pen/Strep | Invitrogen | 15140-122 | ||
Permount | Fisher | SP15-100 | ||
PHA | Sigma-Aldrich | L1668 | ||
Porcine gelatin | Sigma-Aldrich | G6144 | ||
ROCK inhibitor | Calbiochem | Y-27632 | ||
SCID beige mice | Charles River | 250 | ||
Scott’s Wash | Fisher | 6697-32 | Ricca Chemicals | |
Vannas spring scissors | WPI | 14003 | Kidney capsule | |
β-mercaptoethanol | Sigma-Aldrich | M7522 |