מולקולה בודדת הדמיה התחבורה גרעיני
Summary
מיקרוסקופיה מולקולה בודדת approch סיפק תובנות הרומן לתוך התחבורה גרעיני.
Abstract
השירות של מולקולה אחת הגישות פלואורסצנציה מיקרוסקופ הוכח להיות הצלחה גדולה בהבנת תגובות ביולוגיות בעשור האחרון. החקירה של אינטראקציות מולקולריות עם רזולוציות של זמן ומרחב גבוהה עמוק בתוך התאים נותר מאתגר בשל אותות חלשים מטבעם הנובעים מולקולות בודדות. עובד לאחרונה על ידי יאנג et al. הראו כי צר שדה מיקרוסקופיה epifluorescence מאפשר הדמיה של תחבורה nucleocytoplasmic ברמת מולקולה בודדת. לפי הגישה מולקולה בודדת, קינטיקה חשובים, כגון זמן תחבורה יעילות גרעיני, על מולקולות מטען אות תלויים ובלתי תלויים הושגו. כאן אנו תיאר פרוטוקול הגישה המתודולוגית עם רזולוציה spatiotemporal משופרת של 0.4 ms ו -12 ננומטר. ברזולוציה משופרת אפשרה לנו ללכוד תחבורה פעילה חולף ואירועים דיפוזיה סבילה דרך מתחמי נקבוביות הגרעין (NPC) למחצה תאים שלמים. אנו מצפים כי בשיטה זו כדי לשמש הבהרת אירועים מחייב סחר אחרות בתוך התאים.
Protocol
Discussion
יש להקפיד על מנת להבטיח colocalization התקין של מולקולות NE חד במהלך הניסוי. חשוב גם לתת יחס אות לרעש גבוה, במיוחד כאשר האות הוא נמוך בשל תיוג עניים או photobleaching. דיוק לוקליזציה היא מוגבלת על ידי רעש רקע (הנובעים out-of-להתמקד הקרינה, רעש CCD readout, גורמים אחרים הנוכחי כהה).
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
פרויקט זה נתמך על ידי שיפור יכולת המחקר גרנט (באולינג גרין סטייט).
Riferimenti
- Ma, J., Yang, W. Single Molecule Snapshots of Three-Dimensional Distribution of Transient Interactions in Nuclear Pore Complex. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , (2010).
- Sarma, A., Goryaynov, A., Yang, W. Single Molecule Imaging of the Calcium-Regulated Nuclear Pore Permeability. , .
- Yang, W., Musser, M. S. Visualizing single molecules transiting through nuclear pore complexes using narrow-field epifluorescence microscopy. Methods. 39, 316-328 (2006).
- Yang, W., Gelles, J., Musser, M. S. Imaging of single-molecule translocation through nuclear pore complexes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101, 12887-12892 (2004).
