Одиночных молекул изображений ядерного транспорта

Summary

Одноместный микроскопии молекулы approch условии романа понимание ядерной транспорта.

Abstract

Полезность флуоресценции одной молекулы подходы микроскопии было доказано, что большого воспользоваться в понимании биологических реакций в течение последнего десятилетия. Исследование молекулярных взаимодействий с высоким временным и пространственным разрешением глубоко внутри клетки остается сложной из-за изначально слабые сигналы, связанные с отдельными молекулами. Последние работы Ян и соавт. показали, что узкие поля epifluorescence микроскопия позволяет визуализировать nucleocytoplasmic транспорта на одном уровне молекулы. По единого подхода молекулы, важно кинетики, таких, как ядерное время транспортировки и эффективности, для сигнала-зависимые и независимые молекулы груза были получены. Здесь мы описали протокол для методологический подход с улучшенной пространственно-временной разрешение 0,4 мс и 12 нм. Улучшенное разрешение дало нам возможность захвата переходных активного транспорта и пассивной диффузии через события ядерные комплексы поры (NPC) в полу-неповрежденных клетках. Мы ожидаем, что этот метод будет использоваться для выяснения других обязательных и торговли событиях внутри клеток.

Protocol

1. Подготовка клеточной системы для одного эксперимента молекула По крайней мере за неделю до начала, начать новую культуру клеточной линии HeLa из фонда по оттаивания при 37 ° С и положить в 25 см 2 культуру колбу с 5 мл СМИ, Инкубируйте клетки при 37 ° С в течение 5% CO 2 инкубат?…

Discussion

Необходимо соблюдать осторожность, чтобы обеспечить надлежащее колокализации СВ и одиночные молекулы в процессе эксперимента. Кроме того, важно обеспечить высокое отношение сигнал шум, особенно, когда сигнал имеет низкий уровень из-за плохой маркировки или фотообесцвечивания. Локал?…