Thinned - 해골 준비를 사용하여 마우스 시각 피질의 만성 이미징
Summary
이 비디오 및 보충 자료에서 우리는 만성에 대한 프로토콜을 표시<em> 생체내에</emthinned – 해골 준비를 사용하여 손상 뇌> 영상.
Abstract
두 광자 레이저 스캐닝 현미경 (2PLSM)를 사용하여 생체내 이미징에서 그대로 뇌 속에 살아있는 세포와의 연결 프로세스의 연구는 있습니다. 여기에 제공 기술은 CNS에 postsynaptic 흥분성의 사이트의 대부분을 나타내는 작은 구조 아르 돌기 쪽이의 추적을 허용하는 미세한 해상도 몇 시간 포인트 (만성 영상)에서 두뇌의 동일한 지역의 영상을 허용합니다. 분명 몇 시간 동안 지점 미세 외피 구조를 해결하는 능력은 시냅스 및 회로 개조의 형태학의 변화가 근본적인 메커니즘을 설명할 수 있도록 도와있는 뇌 소성의 연구에서 특히 많은 장점이 있습니다. 이 비디오 및 보조 자료에서 우리는 thinned – 해골 준비를 사용하여 손상 두뇌의 생체내 이미징에서 만성위한 프로토콜을 보여줍니다. thinned – 두개골 준비 따라서 염증 반응의 발병을 줄일 수 두라 및 / 또는 피질에 잠재적인 손상을 피할 수 법으로서 접근 방식입니다. 이 프로토콜이 올바르게 수행되면, 그것은 분명 시간의 장기간 동안 손상 두뇌에 돌기 척추 특성의 변화를 모니터링 할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
두 광자 현미경을 사용하여 만성 영상은 소성 2-5 동안 트리거 형태학의 변화를 연구하기 위해 점점 더 인기가 기술되고 있습니다. 여기 우리는 다른 이미징 일에 그대로 마우스의 뇌에 식별 돌기 쪽이에 따라 thinned – 두개골 준비를 보여줍니다. 이 프로토콜에서는 두개골은 피질에 최소한의 손상을 초래하고 두뇌 기능 6을 변경할 수도 있습니다 neuroinflammation 매우 낮은 수준의 결?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 의생명 과학 (AKM)에 버로우즈 웰컴 경력 수상에 의해 지원되었다, 화이트홀 재단 연구 그랜트 (AKM), 슬로언 재단 원정대 (AKM), NIH EY019277 (AKM), 그리고 네이 자금, 비전 교육 그랜트 EY013319 ( EAK).
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fentanyl Citrate | In-house pharmacy | Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail; IP Dose: 0.0125 ml/g Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg |
||
| Medetomindine Hydrochloride | In-house pharmacy | Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail; IP Dose: 0.0125 ml/g Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg |
||
| Midazolam HCL | In-house pharmacy | Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail; IP Dose: 0.0125 ml/g Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg |
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| 2,2,2-tribromoethanol | Avertin Cocktail: Anesthetic; IP Dose: 0.0075 cc/ g Final cocktail conc.: 1% |
|||
| 2-methyl-2-butanol (Final concentration: 0.775%) | Avertin Cocktail: Anesthetic; IP Dose: 0.0075 cc/ g Final cocktail conc.: .775% |
|||
| TC-1000 Temp. Control System for Mice | CWE, Inc. | TC-1000 Mouse | Body Temp. Regulation | |
| Toberadex | In-house pharmacy | Eye Ointment | ||
| 10% Ferric Chloride | Ricca Chemical, Inc. | 3120-32 | Thin-skull preparation | |
| Microsurgical Blade | Sable Industries | S-6400 | Thin-skull preparation | |
| Cyanoacrylate 404,401 | Loctite | P/N 46551 | Thin-skull preparation | |
| Cyanoacrylate 401 | Loctite | P/N 40140 | Thin-skull preparation | |
| Zip Kicker Glue Accelerator | Pacer Technology | PT-29 | Thin-skull preparation | |
| Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-07 | Thin-skull preparation | |
| Microtorque Control Box and Tech2000 Handpiece | Ram Products, Inc. | TECH2000ON/OFF | Thin-skull preparation | |
| #6-0 (0.7 metric ) silk suture | Ethicon | K8894H | Taper C-1 | |
| Eye Dressing Forceps, 10cm, tip width 0.5mm, curved | Surgical Tools | Fine Science Tools | 11152-10 | |
| Extra Fine Bonn Scissors, 8.5cm, straight tip, cutting edge 13mm | Surgical Tools | Fine Science Tools | 14084-08 | |
| Standard Pattern Forceps, straight, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm | Surgical Tools | Fine Science Tools | 11000-12 |
Riferimenti
- Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-51 (2000).
- Holtmaat, A. high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).
- Majewska, A. K., Newton, J. R., Sur, M. Remodeling of synaptic structure in sensory cortical areas in vivo. J Neurosci. 26 (11), 3021-3029 (2006).
- Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging. J Vis Exp. , (2008).
- Yang, G. Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice. Nat Protocols. 5 (2), 201-208 (2010).
- Xu, H. T. Choice of cranial window type for in vivo imaging affects dendritic spine turnover in the cortex. Nat Neurosci. 10 (5), 549-551 (2007).
