फिक्स्ड वॉल्यूम या फिक्स्ड दबाव: रक्तस्रावी शॉक की एक murine मॉडल
Summary
रक्तस्रावी शॉक मॉडल एक विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और संकेत सूजन और आघात के बाद अंत अंग क्षति के साथ जुड़े cascades की पहचान और समझ की सुविधा संसाधन किया गया है. यह आलेख शल्य चिकित्सा और यांत्रिक चूहों में रक्तस्रावी शॉक प्रयोगात्मक प्रक्रिया के साथ जुड़े पहलुओं की एक कदम दर कदम विवरण प्रदान करता है.
Abstract
It is common knowledge that severe blood loss and traumatic injury can lead to a cascade of detrimental signaling events often resulting in mortality. 1, 2, 3, 4, 5 These signaling events can also lead to sepsis and/or multiple organ dysfunction (MOD). 6, 7, 8, 9 It is critical then to investigate the causes of suppressed immune function and detrimental signaling cascades in order to develop more effective ways to help patients who suffer from traumatic injuries. 10 This fixed pressure Hemorrhagic Shock (HS) procedure, although technically challenging, is an excellent resource for investigation of these pathophysiologic conditions. 11, 12, 13 Advances in the assessment of biological systems, i.e. Systems Biology have enabled the scientific community to further understand complex physiologic networks and cellular communication patterns. 14 Hemorrhagic Shock has proven to be a vital tool for unveiling these cellular communication patterns as they relate to immune function. 15, 16, 17, 18 This procedure can be mastered! This procedure can also be used as either a fixed volume or fixed pressure approach. We adapted this technique in the murine model to enhance research in innate and adaptive immune function. 19, 20, 21 Due to their small size HS in mice presents unique challenges. However due to the many available mouse strains, this species represents an unparalleled resource for the study of the biologic responses. The HS model is an important model for studying cellular communication patterns and the responses of systems such as hormonal and inflammatory mediator systems, and danger signals, i.e. DAMP and PAMP upregulation as it elicits distinct responses that differ from other forms of shock. 22, 23, 24, 25 The development of transgenic murine strains and the induction of biologic agents to inhibit specific signaling have presented valuable opportunities to further elucidate our understanding of the up and down regulation of signal transduction after severe blood loss, i.e. HS and trauma 26, 27, 28, 29, 30.
There are numerous resuscitation methods (R) in association with HS and trauma. 31, 32, 33, 34 A fixed volume resuscitation method of solely lactated ringer solution (LR), equal to three times the shed blood volume, is used in this model to study endogenous mechanisms such as remote organ injury and systemic inflammation. 35, 36, 38 This method of resuscitation is proven to be effective in evaluating the effects of HS and trauma 38, 39.
Protocol
1. साधन और सर्जिकल फील्ड तैयार: 1. साधन तैयार करना. सभी शल्यचिकित्सा की प्रक्रियाओं सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग कर प्रदर्शन कर रहे हैं. एक शल्य चिकित्सा नीले पैड और बाँझ क्षेत्र ड्रेसिंग किया जाता है. सभी सामग्री और उपकरणों के उपयोग करने से पहले निष्फल रहे हैं. 6-0 सीवन, कपास टिप applicators, धुंध, पुरुष पुरुष 3 तरह stopcocks, और उपकरणों आटोक्लेव निष्फल रहे हैं. Transducers, पीई 50 है, और पीई 10-टयूबिंग ईथीलीन ऑक्साइड निष्फल रहे हैं. सभी 3 तरह stopcocks, सीरिंज और सुई बाँझ प्राप्त कर रहे हैं. 6-0 सीवन एक इंच के टुकड़ों (6 टुकड़े / पशु) में कटौती की है और छोटे नसबंदी पाउच में डाल दिया. कपास टिप applicators, 4×4 धुंध वर्गों, और पुरुष पुरुष तीन तरह stopcocks या तो छोटे या मध्यम आकार नसबंदी पाउच और autoclaved में डाल रहे हैं. हमारे सर्जिकल उपकरणों आटोक्लेव हर शाम निष्फल रहे हैं. वे जीवाणुरोधी साबुन और पानी के नल का उपयोग सर्जरी के बाद धो रहे हैं. वे एक स्वच्छ शल्य नीले पैड पर सूखे की अनुमति दी हैं. वे तो ध्यान बंध्याकरण पाउच में रखा गया और अगले दिन का उपयोग करने के लिए निष्फल. चूंकि transducers और टयूबिंग प्लास्टिक घटक है, वे गैस, यानी ईथीलीन ऑक्साइड का उपयोग कर निष्फल होना चाहिए. पीई 10-ट्यूबिंग 5 इंच टुकड़ों में काट रहा है और एक छोटे से बंध्याकरण पाउच में रखा जाता है. पीई 50 ट्यूबिंग 18 इंच के टुकड़ों में काट रहा है और एक मध्यम बंध्याकरण पाउच में रखा. 2. सर्जिकल फील्ड. शल्य चिकित्सा क्षेत्र स्थापित करने के लिए, पहले, गर्म मनका अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ पर बारी करने के लिए सुनिश्चित करें के लिए यह सर्जरी शुरू करने से पहले उचित तापमान 300-350 ° एफ तक पहुँचता है. फिर शल्य नीले पैड एक शराब पर नीचे रखकर अगले कदम के लिए आगे बढ़ना benchtop मिटा दिया है. पैड एक खुर्दबीन के नीचे चला जाता है और अन्य परिसंचारी हीटिंग पैड जहां बी.पी. analyzers स्थित हैं पर चला जाता है. दोनों शल्य चिकित्सा नीले पैड पर एक बाँझ ड्रेसिंग क्षेत्र रखें. 70% शराब के साथ रास्ते से एक स्टेनलेस स्टील के उपकरण ट्रे 1 / 3 भरें. पर्याप्त 70% EtOH का उपयोग करने के लिए सभी शल्य चिकित्सा उपकरणों को कवर. एक अलग बाँझ क्षेत्र ड्रेसिंग का उपयोग करें और यह माइक्रोस्कोप के बगल में जगह है. सभी बाँझ उपकरणों, सीवन, धुंध, और इस बाँझ मैदान पर कैथेटर रखें. सावधान रहो, जब बाँझ उपकरणों और सिवनी खोलने उन्हें छू द्वारा उन्हें दूषित नहीं है. यह सबसे अच्छा है बाँझ दस्ताने का उपयोग करें जब इस सेटअप प्रक्रिया कर रही है. 2. यांत्रिक सेट अप और प्रक्रियाएं: 1. कैथेटर सेट अप. सही पैर murine कैथेटर बी.पी., पहले, बाँझ दस्ताने पर डाल को मापने के लिए इस्तेमाल किया सेट अप. फिर autoclaved थैली से बाँझ पीई 10 टयूबिंग मिलता है. सूचक उंगली और अंगूठे उन दोनों के बीच एक इंच के बारे में जाने के साथ टयूबिंग के बीच ले लो. टयूबिंग के इस खंड के सिर्फ एक बिट यह व्यास में पतली कैथेटर प्रविष्टि के साथ मदद कर खींचो. खींच के बाद टयूबिंग यह बाँझ कैंची का उपयोग कर आधे में कटौती. टयूबिंग 5 इंच अब आधा इंच की लंबाई में दो टुकड़े लगभग 2 होना चाहिए. बढ़ाकर अंत बेवेल के लिए सुनिश्चित करें. * Beveled बढ़त बहुत ज्यादा नहीं कोण के रूप में इस पोत दीवार के नीचे के माध्यम से poking द्वारा लुमेन बाहर निकलने के अवसरों को बढ़ाया जा सकता है. टयूबिंग की कुंद unstretched अंत में एक 30g सुई डालें. एक बाँझ 1cc सिरिंज और एक तीन तरह से पानी निकलने की टोंटी. एक शराब पोंछ 10cc बाँझ heparinized नमकीन घोल (0.1ml Heparin/9.9ml खारा) युक्त शीशी के शीर्ष बाँझ का उपयोग करें. 0.6-0.7cc हेपरिन समाधान के साथ सिरिंज भरें. 3 तरीका है कि सीधे पुरुष अंत से भर है के अंत करने के लिए 30g सुई और कैथेटर संलग्न. पानी निकलने की टोंटी, 30g सुई, और टयूबिंग पीई 10-हेपरिन समाधान के साथ भरें. के लिए सभी हवाई बुलबुले प्रणाली से बाहर निकलना सुनिश्चित करें. सभी हवाई बुलबुले को दूर करने का सबसे प्रभावी तरीका है गुरुत्वाकर्षण का उपयोग करने के लिए है. जमीन की ओर सुई प्वाइंट जबकि benchtop टयूबिंग लटकना दे. सुई हब उंगलियों का एक झटका दे और बुलबुले हेपरिन समाधान के शीर्ष पर जारी करेगी. 3 तरह से 30g सुई निकालें और बुलबुले को हटा दें. 3 तरह 1cc सिरिंज में वापस में तरल पदार्थ वापस लेने के लिए किसी भी बुलबुले कि 3 रास्ते में फंस रहे हैं को हटाने और 3 तरह टयूबिंग पुनः अनुलग्न. मिश्रण के लगभग 1cc सिरिंज में रहना चाहिए. माउस के बारे में इस मिश्रण के (कैथेटर निस्तब्धता प्रविष्टि पर प्रत्यक्षता बनाए रखने का एक परिणाम के के रूप में) 0.05cc 1U हेपरिन / माउस के बारे में बराबर प्राप्त होगा. बाँझ शल्य चिकित्सा उपकरणों के साथ ड्रेसिंग क्षेत्र पर इस कैथेटर पूरा रखें. सेट करने के लिए बाएँ पैर murine कैथेटर एक ही प्रक्रिया के रूप में तीन तरह से पानी निकलने की टोंटी के अपवाद के साथ ऊपर वर्णित का पालन करें. बाएं पैर खून आकर्षित करने के लिए प्रयोग किया जाता है और 3 तरह पानी निकलने की टोंटी की आवश्यकता नहीं है. Heparinized खारा मिश्रण के 0.15-0.2cc के साथ एक बाँझ 1cc सिरिंज भरें. 30g सुई और पीई-10 tubi ऊपर हुकसीधे 1cc सिरिंज के लिए एनजी. इस बाएं पैर कैथेटर प्रणाली समाधान के साथ भरें. इस प्रणाली से बुलबुले भी निकालें. बाँझ बाँझ उपकरणों के साथ ड्रेसिंग क्षेत्र पर पूरा कैथेटर रखें. 2. ट्रांन्सड्यूसर सेट अप. माइक्रो मेड विनिर्देशों के अनुसार एक बाँझ transducer digi मेड BPA 400 विश्लेषक के लिए हुक. Transducer के दोनों सिरों पर एक 3 तरह पानी निकलने की टोंटी संलग्न. Lactated घंटी समाधान (एलआर) के साथ एक 10cc सिरिंज भरें और यह 3 तरह देते हैं तो transducer benchtop पर फ्लैट झूठ होगा. पीई-50 टयूबिंग 18-इंच presterilized precut के टुकड़े के दोनों सिरों में एक 23g सुई डालें. 3 तरह 10cc सिरिंज संलग्न के साथ पीई 50-टयूबिंग की एक छोर संलग्न. और LR के साथ पीई 50 सेट अप 3 तरह से भरें. सभी हवाई बुलबुले के रूप में पिछले अनुभाग में वर्णित व्यवस्था से बाहर निकलना सुनिश्चित करें. Transducer के लिए 3 तरह पुनः अनुलग्न और transducer और 2 एन डी LR के साथ 3 तरह भरने. अंत में, सही पैर murine कैथेटर को अनुलग्नक के लिए पीई-50 टयूबिंग के 23g सुई करने के लिए पुरुष पुरुष धातु Leur ताला पानी निकलने की टोंटी देते हैं. * यह महत्वपूर्ण है कि द्रव transducer में रहना जब ऑपरेशन में. * अंशांकन और लघु मेड प्रोटोकॉल के अनुसार शून्य प्रक्रियाओं का पालन करें. 3. शल्य चिकित्सा और प्रायोगिक प्रक्रिया: 1. शल्यचिकित्सा की प्रक्रियाओं. Pentobarbitol सोडियम की एक intraperitoneal इंजेक्शन (Nembutol) (70mg/kg @ 01:10 मन्दन) प्रशासन द्वारा शुरू करो. इस प्रक्रिया द्वारा पूरा किया है, पहले, इसकी पूंछ के आधार (सबसे प्रॉक्सिमल अंत) का उपयोग कर अपने पिंजरे से माउस उठा. अगला, पिंजरे के शीर्ष पर पशु जगह है जबकि अभी भी अपनी पूंछ पकड़. माउस की गर्दन के कूड़ा और forepaws पीछे सिर्फ माउस के दोनों तरफ अंगूठे और मध्यम उंगली के साथ ले लो. तर्जनी / क्षेत्र सिर, गर्दन पर सिर स्थिर कूड़ा की ओर त्वचा वापस खींचने के लिए प्रयोग किया जाता है. माउस पूंछ तो लपेटा जाता है और छोटी उंगली और अनामिका के बीच आयोजित जबकि अनामिका माउस रीढ़ की काठ का क्षेत्र में दबाया जाता है. माउस सो 5 मिनट के भीतर होना चाहिए. जानवर के बाद धातु शल्य चिकित्सा की थाली पर anesthetized जगह उन्हें ढालुआं स्थिति में है. ढीला पाश टेप तकनीक उनके extremities टेप द्वारा जानवरों को स्थिर करने के लिए प्रयोग किया जाता है. ढीला पाश तकनीक की जरूरत पर जोर देता बस टेप की पतली स्ट्रिप्स में कटौती और शिथिल टेप पंजा करने के लिए अवर सामने अंगों में से प्रत्येक के आसपास और हिंद पंजा करने के लिए अवर अंगों के प्रत्येक के आसपास लपेटन. टेप तो खुद को वापस अटक और टेप से अधिक बाईं बोर्ड से जुड़ा हुआ है. यह चूहों के extremities के लिए एक अधिक प्राकृतिक शारीरिक स्थिति की कल्पना करने के लिए अनुमति देता है. जानवर के पेट और वंक्षण क्षेत्रों तब Oster A5 कतरनी आकार 40 ब्लेड का उपयोग कर के बाल काटे हैं. एक 4×4 धुंध betadine के साथ doused है और शल्य चिकित्सा के क्षेत्र में तो बाँझपन के लिए नष्ट है. स्थिरीकरण और नसबंदी के बाद, माउस नाक पर isoflurane के 1cc के साथ एक नाक शंकु प्रारंभिक चीरा के पहले कुछ सेकंड के लिए रखा गया है. नाक शंकु एक 50cc शंक्वाकार धुंध के साथ भरा ट्यूब के होते हैं. ट्यूब के नीचे का आधा काट रहा है माउस को संपर्क के बिना नाक के अंदर आराम के लिए एक जगह बनाने. एक टोपी (एक ऊतक भंडारण कंटेनर के नीचे) 50cc शंक्वाकार के अंत पर रखा है isoflurane वाष्पकणों बच नहीं करने के लिए सुनिश्चित करें. एक बार जानवर respirations धीमी गति से शुरू, एक छोटा सा चीरा 4-5mm पेट और बाएँ अनुप्रस्थ abdominus मांसपेशियों की बाईं आंतरिक तिरछा मांसपेशी के समानांतर त्वचा में किया जाता है. और्विक शिरा और धमनी के विच्छेदन के बाद. आसपास की मांसपेशियों या स्पर्श नसों को नुकसान नहीं करने के लिए सुनिश्चित करें. इस विच्छेदन शुरू करने के लिए, पेट कनेक्शन पर dumonts के साथ वसा ऊतकों हथियाने द्वारा परोक्ष और अनुप्रस्थ पेट की मांसपेशियों से वसा ऊतकों को अलग. इस ऊतक मांसपेशी दीवार से दूर खींचो. फिर पेट दूर प्रावरणी और वसा ऊतकों dumonts के अन्य जोड़ी का उपयोग कर चिढ़ा मांसपेशियों के साथ काटना कुंद. बस इस वसा ऊतकों के नीचे और और्विक तंत्रिका के साथ ऊरु नस धमनी झूठ. * Vastus intermedius, medialis, और quadriceps ग्रीवा या rectus ग्रीवा के lateralis मांसपेशियों को नुकसान नहीं करने के लिए सुनिश्चित करें. वहाँ वास्तव में है नहीं करने के लिए ले लो या यहां तक कि इन मांसपेशियों को छूने की जरूरत है. * और्विक तंत्रिका न छूने वाले दूर वसा ऊतकों है कि यह करने के लिए अगले झूठ हथियाने द्वारा तंत्रिका काटना. इस ऊतक laterally शिरा और धमनी से खींचो और तंत्रिका के रूप में इस ऊतक में एम्बेडेड है का पालन करेंगे. के रूप में तंत्रिका पार्श्व खींच लिया है, अन्य dumonts इंगित करें, नीचे रखकर, धमनी के खिलाफ और खोलने और उन्हें बंद करके प्रावरणी काटना कुंद. जहाजों बहुत सतही हैं तो नहीं यकीन है कि होअंतर्निहित मांसपेशियों में खुदाई. तंत्रिका के बाद अलग है, dumonts का उपयोग करने के लिए मांसपेशियों को वाहिकाओं धारण प्रावरणी अलग. Dumonts बंद रखें और जहाजों को dumonts पृष्ठीय पर्ची. के रूप में dumonts की नोक नस के दूसरे पक्ष पर प्रकट होता है, उन्हें प्रावरणी काटना कुंद करने के लिए खोलें. पोत dumonts पृष्ठीय रखें और पहली सीवन ले लो. Dumonts में सिवनी रखो और सिवनी वाहिकाओं और अंतर्निहित मांसपेशियों के बीच किए गए खोलने के माध्यम से वापस खींच. फिर, वहाँ किसी भी आसपास के मांसपेशियों की क्षति की कोई जरूरत नहीं है. शिरा और धमनी के आसपास 3 के कुल, 6-0 sutures के रखो. सीवन एक सबसे पेट की मांसपेशियों को प्रॉक्सिमल है. एक गाँठ बाँध लेकिन यह ढीली और यह hemostat बंद छोड़ दें. hemostat के अवतल बढ़त पशु उदर गुहा पर आराम करना चाहिए. सीवन 2 स्थान में सबसे बाहर का है. यह सिवनी से बांधा जा सकता है है तुरंत वाहिकाओं और hemostated, फिर अवतल पक्ष नीचे ligating. बाहर का और प्रॉक्सिमल sutures के तना हुआ वाहिकाओं (खून की कमी को रोकने के) खींचने के लिए और उन्हें एक कैथेटर प्रविष्टि में सहायता बिट लिफ्ट करने के लिए उपयोग किया जाता है. 3 सीवन एक कैथेटर का समर्थन सिवनी है. बाहर का और प्रॉक्सिमल sutures के बीच इस सिवनी रखें. एक ढीला गाँठ बाँध कि प्रविष्टि के बाद पोत के अंदर कैथेटर को सुरक्षित करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा. बाद sutures सुरक्षित हैं, मोटी पोत दीवार से धमनी की पहचान. यह बहुत सफेद है. धमनी का उपयोग microscissors के शीर्ष पर एक छोटा सा चीरा बनाओ. इस छेद बाहर का सिवनी के करीब तो वहाँ प्रारंभिक कैथेटर प्रविष्टि के लिए एक धमनी के एक पर्याप्त राशि है. Dumonts धमनी पोत लुमेन में dumonts के एक छोर रखने और उन्हें पोत दीवार पर समापन छेद खोलने का प्रयोग करें. यकीन है कि मध्य सीवन धमनी छेद करने के लिए समीपस्थ है तो यह जगह में प्रारंभिक प्रविष्टि के बाद कैथेटर पकड़ करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. धमनियों की दीवार लुमेन में कैथेटर धक्का जबकि कैथेटर से अधिक पोत खींच जबकि पकड़े. हल्के से मध्यम समर्थन करने के लिए जगह में कैथेटर पकड़ सीवन नीचे टाई. समीपस्थ hemostat छोड़ें. यह रिलीज प्रॉक्सिमल सीवन ढीला और जहाजों के आसपास सीवन फिर से खोलना होगा. इस बिंदु पर, दबाव धमनी रक्त कैथेटर में वापस धक्का चाहिए. Pulsating रक्त कैथेटर में दिखाई जानी चाहिए. Dumont के साथ एक कैथेटर के आसपास वाहिकाओं को पकड़ो और अन्य का उपयोग करने के बारे में 4-5mm वाहिका में कैथेटर धक्का. कैथेटर के आसपास पोत होल्डिंग धमनी की फाड़ रोकने में मदद करता है. कैथेटर की नोक सिर्फ आंतरिक परोक्ष और अनुप्रस्थ abdominus मांसपेशियों के नीचे आराम करना चाहिए. रक्त धमनी लाइन में थक्का रोकथाम के लिए, कैथेटर में रक्त निकालने और इसे धक्का वापस माउस में कई बार heparinized द्रव दिखे. द्विपक्षीय और्विक धमनी cannulation के लिए दूसरे चरण के लिए इस प्रक्रिया को दोहराएँ. पशु शारीरिक पैरामीटर पर नजर रखने के लिए मिला, विश्लेषक BPA-400 यानी और धमनी लाइनों फ्लश. शल्य चिकित्सा के लिए आसपास के ऊतकों नम रखने के लिए खोलने में बाँझ खारा के 1 या 2 बूँदें रखो. इस प्रक्रिया के दौरान संतृप्त क्षेत्र रखना सुनिश्चित करें. बाँझपन बनाए रखने में मदद करने के लिए प्रक्रिया भर में पशु पर एक बाँझ ड्रेसिंग क्षेत्र रखें. 70% शराब में शल्य चिकित्सा उपकरणों प्लेस और उन्हें बाँझ धुंध के साथ पोंछ. उन्हें जानवरों के बीच में नसबंदी के लिए गर्म ~ 20 सेकंड के लिए मनका अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ में डाल दिया. शल्य चिकित्सा उपकरणों को निकालें और उन्हें 70% शराब के साथ स्प्रे उन्हें ठंडा करने में मदद. उन्हें बाँझ पैड पर रखें. सुनिश्चित करें कि वहाँ कोई यंत्र है कि वापस अगले पशुओं में ड्रिप पर छोड़ दिया शराब. 2. रक्तस्रावी शॉक. एक 15min ओवर. समय सीमा, माउस रक्त की मात्रा का 1 / 2 लगभग 28-32mm पारा के एक मतलब धमनी दबाव को प्राप्त करने के लिए वापस ले लिया है. * एक 25-27G माउस के लिए वांछित दबाव को प्राप्त करने के लिए वापस ले लिया रक्त के प्रारंभिक मात्रा लगभग 0.6cc है यह प्रक्रिया एक निश्चित दबाव के रूप में एक निश्चित मात्रा में विरोध विधि है. इन प्रक्रियाओं, लेकिन दोनों तय दबाव और तय मात्रा नकसीर के लिए पीछा कर सकते हैं. जबकि लगातार नजर रखी जा रही है, पशु रक्तस्रावी सदमे में 1.5 3hours के लिए रहेगा. के रूप में जानवर के लिए क्षतिपूर्ति करने का प्रयास करता है और मतलब धमनीय दाब फिर थोड़ा वृद्धि करने के लिए शुरू होता है (बी.पी. / मानव संसाधन विश्लेषक के माध्यम से दिखाई) वांछित दबाव को प्राप्त करने के लिए अधिक रक्त वापस लेने के लिए. हालांकि खुराक (0.05cc Nembutol आईपी) शायद ही कभी एचएस प्रक्रिया के दौरान की जरूरत है, जानवर श्वसन, गलमुच्छा आंदोलन, पलटा परीक्षण, और डिजिटल बी.पी. / HR पढ़ने निर्धारित है जब एक जानवर संज्ञाहरण के पूरक की जरूरत है मदद मिलेगी. पशु दीपक के नीचे और एक परिसंचारी हीटिंग पैड करने में मदद के लिए 36-37 के एक तापमान बनाए रखने पर रखा जाता है डिग्री सेल्सियस रक्तस्रावी शॉक प्रक्रिया के माध्यम से. तापमान एक गुदा जांच के माध्यम से जाँच की है. 3. पुनर्जीवन. बाद सदमे समय elapsते, जानवर (नि.) पुनर्जीवित है lactated (एलआर) समाधान 3x प्रत्येक पशु शेड रक्त की मात्रा की एक निश्चित मात्रा में Ringers का उपयोग. LR मात्रा एक सिरिंज पंप के बग़ैर सेट के माध्यम से प्रशासित किया जाता है, एक स्थिर दर, एक 15min से अधिक मात्रा में. अंतराल. कैथेटर को निकालें और 3 sutures का उपयोग वाहिकाओं ligate. बस प्रॉक्सिमल सीवन पिछले कैथेटर खींचो और इस सिवनी पूरी तरह से बंद टाई. यह किसी भी रक्त की हानि को रोकने जाएगा. संपार्श्विक प्रवाह इस्कीमिक बनने से हिंद अंग को रोकता है. 4. Rescitation पोस्ट. अनुसंधान के बाद दोनों हिंद अंग उद्घाटन बाँझ 4-0 PDSII सीवन का उपयोग सिलना हैं. ढीला पाश टेप निकाल दिया है और पशुओं जो कई घंटे के बाद वसूली के लिए एक परिसंचारी हीटिंग पैड पर रखा है एक स्वच्छ पिंजरे में रखा जाता है. एनाल्जेसिक के रूप में पशुओं संज्ञाहरण से waken ठीक से दर्द का प्रबंधन शुरू प्रशासित किया जाना चाहिए. Buprenorphine 0.1mg/kg () subcutaneously है इंजेक्शन के रूप में पशुओं को शारीरिक गतिविधि शुरू, लेकिन उससे पहले नहीं, इतनी के रूप में समझौता करने के लिए नहीं श्वसन समारोह. आक्रामक पोस्ट ऑपरेटिव IACUC अनुमोदित प्रोटोकॉल, व्यक्तिगत पशु व्यवहार, और मौजूदा चिकित्सा शर्तों द्वारा warranted के रूप में निगरानी के प्रयोग की सिफारिश की है. 4. सफलता के लिए रहस्य: जब जहाजों विदारक, ऊरु तंत्रिका छू नहीं यकीन है Rectus ग्रीवा, rectus lateralis और vastus medialis मांसपेशियों को नुकसान नहीं करने के लिए सुनिश्चित करें. वहाँ वास्तव में है नहीं करने के लिए ले लो या यहां तक कि इन मांसपेशियों को छूने की जरूरत है. भी इस के रूप में तेजी से कैथेटर के बेवल के कोण बनाने कैथेटर लुमेन और अनियंत्रित खून बह रहा बाहर निकलने के लिए नेतृत्व करेंगे के रूप में संभव के रूप में बाँझ रहने के लिए अतिरिक्त प्रयास ले सुनिश्चित करें. सुनिश्चित करें कि वहाँ कैथेटर या transducer प्रणालियों में से किसी में कोई हवाई बुलबुले हैं. Transducer में एलआर तरल पदार्थ है, जबकि यह आपरेशन में है सुनिश्चित करें. एक सूखी चलाने अपने बी.पी. प्रणाली को नुकसान पहुंचा सकता है. छोटे धमनियों छेद बनाओ. धमनी बाहर का सिवनी करीब छेद बनाओ. जबकि एक साथ कैथेटर प्रविष्टि के लिए इसे खत्म पोत खींच क्रम में धमनी तेजस्वी से बचने के कैथेटर पुश. बाँझ खारा के साथ संतृप्त करने के लिए अनियंत्रित ऊतकों को नुकसान या तरल पदार्थ की हानि को रोकने के पैर में शल्य चिकित्सा के उद्घाटन रखना सुनिश्चित करें. धैर्य और कौशल महत्वपूर्ण हैं. पशु शरीर क्रिया विज्ञान के लिए प्रयोग भर में करीब ध्यान भुगतान करें. 5. पोस्ट ऑपरेटिव चिंताएं: पैर में ischemia के लिए जाँच करें. हालांकि संपार्श्विक के प्रवाह को रोकने चाहिए. पशु शल्य चिकित्सा हेरफेर और जुड़े सूजन का एक परिणाम के के रूप में हिंद अंग का उपयोग कर मुसीबत हो सकता है. दर्द उचित प्रबंधित. मार्मिक और बाद में तंत्रिका हानिकारक जानवर की असमर्थता के लिए नेतृत्व जुटाने सकता है.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
अनुदान / स्रोत संख्या रक्तस्रावी GM053789 शॉक की आण्विक जीवविज्ञान
Materials
| Instrument | Manufacturer | Catalogue Number |
|---|---|---|
| Dumonts(SS/45° angle 0.2×0.12mm-tip, 13.5cm length) | Fine Science Tools | 11203-25 |
| Surgical scissors (straight-12cm) | Fine Science Tools | 14068-12 |
| Hemostats (curved-12.5cm) | Fine Science Tools | 13009-12 |
| Microscissors (spring scissors- straight-8cm) | Fine Science Tools | 15000-00 |
| Forceps (0.8mm-tip, curved-10cm) | Fine Science Tools | 11050-10 |
| suture reel 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 |
| suture 4-0 PDSII | Penn Vet | ETHZ304H |
| gauze 4×4 | can be purchased through any global vendor | |
| cotton-tip applicator | can be purchased through any global vendor | |
| 30G needle | can be purchased through any global vendor | |
| 23G needle | can be purchased through any global vendor | |
| 3cc syringe | can be purchased through any global vendor | |
| 5cc syringe | can be purchased through any global vendor | |
| 10cc syringe | can be purchased through any global vendor | |
| 50cc conical tube | can be purchased through any global vendor | |
| 1cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 |
| Polyethylene 10 tubing 100` (PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P |
| Polyethylene 50 tubing 100` (PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B |
| 3-way stopcock | Fisher Scientific | NC9779127 |
| surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 |
| Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 |
| tape rolls 1″ | Corporate Express | MMM26001 |
| straight side wide mouth jars (used as cap for nose cone) | VWR | 159000-058 |
| stainless steel tray 8″ x 11″ | VWR | 62687-049 |
| male-male leur lock 3-way | VWR | 20068-909 |
| sterilization pouch 3″x8″ | VWR | 24008 |
| sterilization pouch 5″x10″ | VWR | 24010 |
| Wild M650 microscope w/ boom stand | Leica | |
| Leica IC D digital camera/live image | Leica | |
| Digi-Med BPA-400 analyzer & systems integrator | Micro-Med | SYS-400 |
| TXD-310 (Digi-Med Transducer) | Micro-Med | TXD-300 |
| Computer | Dell | |
| Hot bead instrument sterilizer | VWR | 18000-45 |
| Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 |
| circulating heating pad 18×26 | Harvard | py872-5272 |
| rectal thermometer | Kent Scientific | RET-3 |
| Reagent | Concentration | Manufacturer | Catalogue Number |
|---|---|---|---|
| Pentobarbital Sodium (Nembutol Sodium Solution) | 70mg/kg | Ovation | |
| Buprenorphine HCl | 0.1mg/kg | Bedford Laboratories | |
| Lactated Ringers Injection 250cc IV bag | Baxter | ||
| Aerrane (Isoflurane) | 99.9% | NLS Animal Health | 105996 |
| Heparin Sodium | 1000U | Abraxis | |
| Bacteriostatic Sodium Chloride | 0.9% | Hospira | |
| Ethyl Alcohol | 70% | Pharmaco-AAPER | |
| Triadine Povidone Iodine (Betadine) | Triad disposables |
References
- Baker, C. C., Oppenheimer, L., Stephens, B. Epidemiology of trauma deaths. Am J Surg. 140, 44-50 (1980).
- Hierholzer, C., Billiar, T. R. Molecular mechanisms in the early phase of hemorrhagic shock. Langenbeck’s Arch Surg. 386, 302-308 (2001).
- Dutton, R. P., Stansbury, L. G., Leone, S., Kramer, E., Hess, J. R., Scalea, T. M. Trauma Mortality in Mature Trauma Systems: Are We Doing Better? An Analysis of Trauma Mortality Patterns. J Trauma. , (2010).
- Frink, M., van Griensven, M., Kobbe, P., Brin, T., Zeckey, C., Vaske, B., Krettek, C., Hildebrand, F. IL- 6 predicts organ dysfunction and mortality in patients with multiple injuries. Scand J Trauma Resusc Emerg Med. 17, 49-49 (2009).
- DeCamp, M. M., Demling, R. H. Posttraumatic multisystem organ failure. JAMA. 260, 530-534 (1988).
- Faist, E., Baue, A. E., Dittmer, H., Heberer, G. Multiple Organ Failure in Polytrauma Patients. Journal of Trauma. 23, 775-787 (1983).
- Kalff, J. C., Hierholzer, C., Tsukada, K., Billiar, T. R., Bauer, A. J. Hemorrhagic shock results in intestinal muscularis intercellular adhesion molecule (ICAM-1) expression, neutrophil infiltration, and smooth muscle dysfunction. Arch Orthop Trauma Surg. 119, 89-93 (1999).
- Kobbe, P., Stoffels, B., Schmidt, J., Tsukamoto, T., Gutkin, D., Bauer, A., Pape, H. C. IL-10 deficiency augments acute lung but not liver injury in hemorrhagic shock. Cytokine. 45, 26-31 (2009).
- Ulloa, L., Tracey, K. J. The ‘cytokine profile’ a code for sepsis. Trends in Mol. Med. 11, 56-63 (2005).
- Darwiche, S., Kobbe, P., Pfeifer, R., Kohut, L., Pape, H. C., Billiar, T. R. Pseudofracture: an acute peripheral tissue trauma model. J Vis Exp. , (2010).
- Tsukamoto, T., Pape, H. C. Animal models for trauma research: what are the options. Shock. 31, 3-10 (2009).
- Moochhala, S., Wu, J., Lu, J. Hemorrhagic shock: an overview of animal models. Front Biosci. 14, 4631-469 (2009).
- Chaudry, I. H., Ayala, A., Ertel, W., Stephan, R. N. Hemorrhage and resuscitation: immunological aspects. Am J Physiol Regulatory Integrative Comp Physiol. 259, 663-678 (1990).
- Lagoa, C. E., Bartels, J., Baratt, A., Tseng, G., Clermont, G., Fink, M. P., Billiar, T. R., Vodovotz, Y. The role of initial trauma in the host’s response to injury and hemorrhage: insights from a correlation of mathematical simulations and hepatic transcriptomic analysis. Shock. 26, 592-600 (2006).
- Prince, J. M., Levy, R. M., Yang, R., Mollen, K. P., Fink, M. P., Vodovotz, Y., Billiar, T. R. Toll-like receptor-4 signaling mediates hepatic injury and systemic inflammation in hemorrhagic shock. J Am Coll Surg. 202, 407-417 (2006).
- Meng, Z. H., Dyer, K., Billiar, T. R., Tweardy, D. J. Essential role for IL-6 in postresuscitation inflammation in hemorrhagic shock. Am J Physiol Cell Physiol. 280, C343-C351 (2001).
- McCloskey, C. A., Kameneva, M. V., Uryash, A., Gallo, D. J., Billiar, T. R. Tissue Hypoxia activates JNK in the liver during hemorrhagic shock. Shock. 22, 380-386 (2004).
- Li, Y., Xiang, M., Yuan, Y., Xiao, G., Zhang, J., Jiang, Y., Vodovotz, Y., Billiar, T. R., Wilson, M. A., Fan, J. Hemorrhagic shock augments lung endothelial cell activation: role of temporal alterations of TLR4 and TLR2. Am J Phsyiol Regul Integr Comp Physiol. 297, 1670-1680 (2009).
- Xu, Y. X., Ayala, A., Chaudry, I. H. Prolonged immunodepression after trauma and hemorrhagic shock. J Trauma. 44, 335-341 (1998).
- Abraham, E., Chang, Y. H. Haemorrhage-induced alterations in function and cytokine production of T cells and T cell subpopulations. Clin. Exp. Immunol. 90, 497-502 (1992).
- Peitzman, A. B., Billiar, T. R., Harbrecht, B. G., Kelly, E., Udekwu, A. O., Simmons, R. L. Hemorrhagic Shock. Curr Probl Surg. 32, 925-1002 (1995).
- Angele, M. K., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Ayala, A., Cioffi, W. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. Sex steriods regulate pro- and anti- inflammatory cytokine release by macrophages after trauma-hemorrhage. Am. J. Physiol. 277, C35-C42 (1999).
- Takashi, K., Hubbard, W. J., Choudhry, M. A., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. Trauam- Hemorrhage induces depressed splenic dendritic cell function in mice. J of Immunology. 177, 4514-4520 (2006).
- Lenz, A., Franklin, G. A., Cheadle, W. G. Systemic inflammation after trauma. Injury, Int. J. Care Injured. 38, 1336-1345 (2007).
- Frei, R., Steinle, J., Birchler, T., Loeliger, S., Roduit, C., Steinhoff, D., Seibl, R., Buchner, K., Seger, R., Reith, W., Lauener, R. P. MHC class II molecules enhance Toll-like receptor mediated innate immune responses. PloS One. 5, 8808-8808 (2010).
- Matsutani, T., Anantha Samy, T. S., Kang, S. C., Bland, K. I., Chaudry, I. H. Mouse genetic background influences severity of immune responses following trauma-hemorrhage. Cytokine. 30, 168-176 (2004).
- Prince, J. M., Levy, R. M., Bartels, J., Baratt, A., Kane, J. M., Lagoa, C., Rubin, J., Day, J., Wei, J., Fink, M. P. In silico and in vivo approach to elucidate the inflammatory complexity of CD14-deficient mice. Mol Med. 12, 88-96 (2006).
- Kobbe, P., Stoffels, B., Schmidt, J., Tsukamoto, T., Gutkin, D. W., Bauer, A. J., Pape, H. C. IL-10 deficiency augments acute lung but not liver injury in hemorrhagic shock. Cytokine. 45, 26-31 (2009).
- Prince, J. M., Ming, M. J., Levy, R. M., Liu, S., Pinsky, D. J., Vodovotz, Y., Billiar, T. R. Early Growth Response 1 mediates the systemic and hepatic inflammatory response initiated by hemorrhagic shock. Shock. 27, 157-164 (2007).
- Matsutani, T., Samy, A. n. a. n. t. h. a., Kang, T. S., Bland, S. -. C., Chaudry, K. I., H, I. Mouse genetic background influences severity of immune responses following trauma-hemorrhage. Cytokine. 30, 168-176 (2005).
- Rushing, G. D., Britt, L. D. Reperfusion injury after hemorrhage: a collective review. Ann Surg. 247, 929-937 (2008).
- Makley, A. T., Goodman, M. D., Friend, L. W., Bailey, S. R., Lentsch, A. B., Pritts, T. A. Damage control resuscitation with fresh blood products attenuates the systemic inflammatory response following hemorrhagic shock. J Surg Res. 158, 423-423 (2010).
- Stansbury, L. G., Dutton, R. P., Stein, D. M., Bochicchio, G. V., Scalea, T. M., Hess, J. R. Controversy in trauma resuscitation: do ratios of plasma to red blood cells matter?. Transfus Med Rev. 23, 255-265 (2009).
- Gao, J., Zhao, W. X., Xue, F. S., Zhou, L. J., Yu, Y. H., Zhou, H. B. Effects of different resuscitation fluids on acute lung injury in a rat model of uncontrolled hemorrhagic shock and infection. J Trauma. 6, 1213-1219 (2009).
- Maier, S., Holz-Holzl, C., Pajk, W., Ulmer, H., Hengl, C., Dunser, M., Haas, T., Velik-Salchner, C., Fries, D., Greiner, A., Hasibeder, W., Knotzer, H. Microcirculatory parameters after isotonic and hypertonic colloidal fluid resuscitation in acute hemorrhagic shock. J Trauma. 66, 33-45 (2009).
- Stahel, P. F., Smith, W. R., Moore, E. E. Current trends in resuscitation strategy for the multiply injured patient. Injury. 40, 27-35 (2009).
- Dar, D. E., Soustiel, J. F., Zaaroor, M., Em, B., L, A., Shapira, Y., Semenikhina, L., Solopov, A., Krausz, M. M. Moderate lactated ringer’s resuscitation yields best neurological outcome in controlled hemorrhagic shock combined with brain injury in rats. Shock. , (2009).
- Moon, P. F., Hollyfield-Gilbert, M. A., Myers, T. L., Uchida, T., Kramer, G. C. Fluid compartment in hemorrhaged rats after hyperosmotic crystalloid and hyperoncotic crystalloid resuscitation. Am J Physiol. 270, F1-F8 (1996).
- Perel, P., Roberts, I. Colloids vs crystalloids for fluid resuscitation in critically ill patients. Cochrane Database System Rev. 4, CD000567-CD000567 (2007).
Cite This Article
Kohut, L. K., Darwiche, S. S., Brumfield, J. M., Frank, A. M., Billiar, T. R. Fixed Volume or Fixed Pressure: A Murine Model of Hemorrhagic Shock. J. Vis. Exp. (52), e2068, doi:10.3791/2068 (2011).