本稿では、ニワトリ胚の中枢神経系の様々な領域にヒト幹細胞を移植するための手法を提案する。これが用意されています<em> in vivoで</em胚組織の環境におけるヒト幹細胞の様々なタイプの増殖と分化を評価するための>モデル。
ニワトリ胚は、標準化における細胞の挙動を研究するために、通常の胚と胎児の発育を研究するためと異種移植実験のための古典的な動物モデルである<em> in vivoで</em>環境。ニワトリ胚の主な利点は、低コスト、高いアクセシビリティ、手術操作の容易さと十分に発達した免疫システムの欠如などがあります。ニワトリ胚への異種移植は、細胞増殖、分化と行動、定義されている胚組織のニッチのシグナルに対する細胞の応答、および腫瘍形成能に関する貴重な情報を提供することができます。ニワトリの胚に細胞を移植しても他の動物モデルにおける移植実験に向けた一歩になることができます。最近ニワトリ胚は神経原基への移植後のヒト幹細胞や前駆細胞の神経性の可能性を評価するために使用されています<sup> 1月6日</sup>。このビデオでは、ニワトリ胚の発達中の中枢神経系にヒト幹細胞を移植するための手順全体を文書化する。希望の年齢の胚が発達するまでの手順では、受精卵の孵化から始まります。卵殻は、その後開かれ、胚は胚と卵黄の間に色素を注入することで対比される。小病変は、宿主組織へのその後の統合を促進する細胞の沈着のための再生サイトを作成し、顕微鏡を用いて神経管で作られています。我々は、後脳と脊髄を形成し、脳を形成する神経管の一部の内腔に神経管の一部で行われたそのような病変にヒト幹細胞の注射を示しています。胚体外静脈と動脈に全身注射はまた中枢神経系を含む血管組織に細胞を提供する別の方法として実証されています。最後に我々は、さらなる発展の数日後に卵から胚を削除する方法と、その後の生理的、組織学的または生化学的解析のための無料の脊髄を分析する方法を示します。
ニワトリ胚は、異種移植の実験のための便利で多目的な動物モデルである。胚や胎児の発達中に機能的な免疫システムの欠如は、インキュベーションの温度を許容する任意の種由来の細胞の生存と発展を可能にする。ニワトリ胚は、幹細胞(refにレビュー。15)の様々な種類の再生可能性をテストするために使用されている。哺乳類の幹細胞は、彼らがその軸索投射ニューロンを生み出すことができる中枢神経系、を含むニワトリ胚の組織に統合できる、シナプスの接続性と電気生理学的特性は、機能的神経回路の1,2のコンテキストで評価することができる。
外科手術が比較的容易であり、注射ではなく、定位の制御を視覚的に下に行われるため、胚の数は、簡単に一回の実験内の異なる実験条件に対応するために増加することができます。一般的に細胞を4時間の実験中20から30胚に注入することができます。胚のポスト噴射の死亡率は、主要な制限要因である。注意事項は、出血と脱水を避けるように注意する必要があります。自然死亡率の増加で、特定の重要な発達段階があることに注意してください。重要な発達段階の前に暖かい、滅菌チキンリンガー以下の注射と一日の数mLで胚を補うだけでなく、卵のウィンドウは、漏れを避けるために、しっかりと密封されてと志向であることを確認、生存率を向上させます。テープシールによる漏れが発生した場合、テープを取り外し表面および再テープを乾燥させる。一部の研究者は、ウィンドウを密封するためにワックスやガラスまたはプラスチック製のカバースリップを使用してください。死亡率は、偽手術胚対注入で大幅に異なってはいけません。
我々は脳と脊髄の原基にヒト幹細胞の注入にここに焦点を当てているが、幹細胞はまた、他の臓器の原基(例REFの4参照)に注入することができます。各器官は独自の課題となっています。例えば、心臓への注射が原因ピペットの浸透に高い機械的抵抗をしているため、他の一方で注射前に室温に胚を冷却することによって減速することができるの動き、の挑戦することができます。内腔を欠いている器官は、十分な量の注入に対応していない可能性があり、外科的病変は、レセプタクルを作成するために必要となる場合があります。それが組織にヒト幹細胞の統合を促進するため我々の経験では、後の病変組織再生が有利です。細胞はまた、そのような神経堤由来の末梢神経節16,17を含む間葉系誘導体、中に取り込みを達成する手段として分散体節間葉または移行する神経堤などの胚間充織に注入することができます。
The authors have nothing to disclose.
作業はHelse OG Rehabilitering(JLB)、ノルウェーの研究評議会(GHとJCG)とオスロ大学(NKとJCG)からの補助金によって支えられて。
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Fluorescent microscope | Microscope | Olympus IX-81 | ||
Stereo Investigator | Program | MicroBrightField | ||
MIP-GFP mice | Mice | Jackson Laboratory | ||
Mathematica | Program | Wolfram | ||
Image J | Program | NIH | ||
Slidebook | Program | Olympus |