기계 자극에 라이브 세포 응답 통합 광학과 원자 힘 현미경에 의해 연구
Summary
본 논문은 문화에 살고있는 세포의 기계적 자극에 대한 통합 원자의 운영 독자 강제 광학 이미징 현미경을 지시하는 것을 목표로하고있다. 단계별 프로토콜이 제공됩니다. 기계적 자극에 살고 세포 응답을 보여주는 대표적인 데이터 집합이 제공됩니다.
Abstract
살아있는 세포가 기계적 힘을 감지하는 메커니즘을 이해하기 위해서는, 높은 공간과 시간적 해상도를 가진 하위 세포 수준에서 세포의 행동을 조사할 수있는 그들이 반응하고 환경에 적응하는 방법, 새로운 기술하는 것은 개발되었습니다. 따라서, 원자 힘 현미경 (AFM)은 총 내부 반사 형광 (TIRF) 현미경과 고속 회전하는 디스크 (FSD) 공촛점 현미경과 통합되었습니다. 통합 시스템은 실시간으로 기계 자극에 세포 반응의 직접적인 광학 이미징을 허용, 모든 자기편 라이브 세포에서 분자 역동적인 연구 광범 광범위하게 적용됩니다. 굴지의 필라멘트와 초점 adhesions의 중요한 다시 정리하기는 인해 세포 체내 세포 구조로 변화를 유도하는 혀끝의 세포 표면에서 로컬 기계 자극을 표시했다. 이러한 혁신 기술은 기계적 강제에 대한 응답으로 사는 셀 구조 조정과 역학을 이해하는 새로운 정보를 제공합니다. 상세한 프로토콜과 대리인 데이터는 기계적 자극에 표시 라이브 셀 응답이 제공되는 설정합니다.
Protocol
Discussion
Cytoskeleton 70-10과 초점 adhesions가 11-16, 조립 분산 및 세포가 마이 그 레이션 또는 기계적 강제로 17 답변으로 넘겨 역동적인 구조입니다. 그들은 세포 성장, 생존, 그리고 유전자 발현을 조절에 중요한 기능을합니다. 그들의 구체적인 유통 및 역학을 아는 것은 세포가 모체와 자신 사이의 의사 소통 방법에 대한 이해를 제공합니다.
이 새로운 현미경…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
플라스미드 Vinculin – GFP는 마이클 데이비슨, 플로리다 주립 대학, 탤러해시, 플로리다의 선물 케네스 야마다, 플라스미드 국립 보건 연구소, 치과와 Craniofacial 연구의 국립 연구소, 베데스다, 메릴랜드, 그리고 굴지 – mRFP에서 선물했다.
이 작품은 NSF 경력 보너스 # 0747334 및 AHA – 국립 SDG # 0835205N Andreea Trache에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| AFM tip | Novascan Technologies | 2 micron Borosilicate bead, 0.01N/m, Biotin Surface | ||
| avidin | Sigma Aldrich | A9275 | 1mg/mL in DPBS | |
| Fibronectin | Sigma Aldrich | F4759 | 1 mg/mL | |
| DPBS | Invitrogen | 21600-051 | ||
| Amaxa transfection kit for Smooth Muscle Cells | Lonza | VPI-1004 | ||
| Mattek glass bottom dishes | MatTek Corporation | P60G-1.5-30-F | Sterile 60mm Falcon dishes with glass bottom coverslip no. 1.5 |
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