Inriktning av Deep Brain Strukturer med Microinjections för leverans av läkemedel, virala vektorer eller Transplantation Cell
Summary
I denna artikel visar vi en metod för att göra glas kapillär nålar med ett 50-ìm lumen. Denna teknik minskar betydligt hjärnskador, minimerar passiv diffusion av droger och tillåter en exakt inriktning i gnagare hjärnan.
Abstract
Microinjections i hjärnparenkymet är viktiga rutiner för att leverera läkemedel, virala vektorer eller transplantationer cell. Hjärnan lesion som en injektion nål producerar under sin bana är ett stort problem, särskilt i musen hjärnan för inte bara hjärnan är liten, men ibland också flera injektioner behövs. Vi visar här en metod att tillverka glas kapillär nålar med en 50-ìm lumen som avsevärt minskar hjärnskador och tillåter en exakt inriktning i gnagare hjärnan. Denna metod ger en leverans av små volymer (från 20 till 100 Nl), minskar blödningar risker och minimerar passiv diffusion av narkotika till hjärnparenkymet. Genom att använda olika storlek kapillärrör glasrör eller ändra nålen lumen kan flera typer av ämnen och celler injiceras. Microinjections med ett glas kapillärrör utgör en betydande förbättring i injektionen tekniker och deep brain inriktning med minimala skador i smågnagare.
Protocol
Discussion
Metoden visade i denna video är mycket användbar för att leverera de flesta av de läkemedel eller virala vektorer i mycket exakta platser i hjärnan. Några av de viktigaste fördelarna med denna teknik är tillförlitlighet mäter, riktigheten av injektioner och den lilla storleken på hjärnan lesion och tarmkanalen skador 1, 2, 5, 6. När tekniken är standardiserad intervallet mistargeting bör 50 ìm eller mindre 1, 2. Cell transplantationer kan också göras genom att använda bredare, 10…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
OG-P stöddes av CONACyT s bidrag (CB-2008 till 101.476) och FRABA (686/10). AQ-H som stöds av National Institute of Health, Howard Hughes Medical Institute, Robert Wood Johnson Foundation och Maryland Stem Cell Foundation.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Capillary glass tube | Wiretrol I | 5-000-1001 | ||
| Micropipette puller | Kopf | Model 730 | ||
| Microforge | World Precision Instruments | Model 48000 | ||
| Mineral oil | MSDS | M7700 | ||
| High-vacuum grease | Dow Corning | 05054-AB | ||
| Anesthesia: 2.5% Avertin | 2,2,2-tribromoethanol + tert-amyl alcohol, 1:1 w/v | |||
| Heater pad | Mastex | Model 900 | ||
| Stereotactic device | Kopf | Model Kopf-900 | ||
| Surgical scalpel blade # 15 | Medi-Cut | |||
| Micro driller | Ideal Micro Drill | 67-1000 | ||
| Fine forceps | Fine Scientific Tools | |||
| 1-μL Micropipette | Rainin | |||
| Parafilm M. | ||||
| Surgical microscope | Zeiss | Vasiorkop with Contraves system | ||
| Microinjector | Narishige | Model MO-10 |
Riferimenti
- Menn, B. Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain. J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).
- Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Epidermal Growth Factor Induces the Progeny of Subventricular Zone Type B Cells to Migrate and Differentiate into Oligodendrocytes. Stem Cells. 27, 2032-2043 (2009).
- Hall, S. M. Some aspects of remyelination after demyelination produced by the intraneural injection of lysophosphatidyl choline. J Cell Sci. 13, 461-477 (1973).
- Webster, G. R., Thompson, R. H. Observations on the presence of lysolecithin in nervous tissues. Biochim Biophys Acta. 63, 38-45 (1962).
- Doetsch, F., Caille, I., Lim, D. A., García-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Subventricular Zone Astrocytes Are Neural Stem Cells in the Adult mammalian Brain. Cell. 97, 1-20 (1999).
- Doetsch, F., Petreanu, L., Caille, I., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. EGF converts transit-amplifying neurogenic precursors in the adult brain into multipotent stem cells. Neuron. 36, 1021-1034 (2002).
- Baraban, S. C. Reduction of seizures by transplantation of cortical GABAergic interneuron precursors into Kv1.1 mutant mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 15472-15477 (2009).
- Richardson, R. M., Barbaro, N. M., Alvarez-Buylla, A., Baraban, S. C. Developing cell transplantation for temporal lobe epilepsy. Neurosurg Focus. 24, E17-E17 (2008).
- Alvarez-Dolado, M. Cortical inhibition modified by embryonic neural precursors grafted into the postnatal brain. J Neurosci. 26, 7380-7389 (2006).
