De organoptypic hippocampus slice cultuur-model is een<em> In vitro</em> Model gebruikt om de neuronale verwonding in een verscheidenheid van paradigma te onderzoeken. In dit artikel beschrijven we de methoden voor het genereren van slice culturen en kwantificeren van neuronale verwonding.
Abstract
Organotypische hippocampale slice cultuur is een in vitro methode om de mechanismen van de neuronale schade in de basisarchitectuur en samenstelling van de hippocampus relatief behouden blijft een te onderzoeken. Het organotypische cultuur systeem maakt het mogelijk voor het onderzoek van neuronale, astrocytaire en microgliale effecten, maar als een ex vivo voorbereiding, wordt niet ingegaan op effecten van de bloedstroom, of aanwerving van perifere inflammatoire cellen. Te dien einde, is deze cultuur methode vaak gebruikt om excitotoxisch en hypoxische schade aan piramidale neuronen van de hippocampus te onderzoeken, maar is ook gebruikt om de ontstekingsreactie te onderzoeken. Hierin beschrijven we de methoden voor het genereren van de hippocampus slice culturen van postnatale knaagdieren hersenen, het toedienen van giftige stimuli om neuronale letsel veroorzaken, en het testen en kwantificeren van hippocampale neuronale dood.
Protocol
1. Voorbereiding Voordat u begint, verzamelen de benodigde chirurgische instrumenten, dissectie en cultuur media, en 7 dagen oude rat of muis pups. Het protocol is hetzelfde voor muis en rat preparaten. (I) materialen en apparatuur Operating schaar (rechte lengte 6 ", cat # RS6818, Roboz, Gaithersburg, MD) Micro ontleden schaar, (lengte 4 '", cat # RS5910. Roboz, Gaithersburg, MD) Koolstofstaal Dumont pincet (cat # RS-504…
Discussion
Er zijn twee belangrijke punten om te volgen om reproduceerbare en consistente resultaten te waarborgen bij het repliceren van experimenten. Ten eerste is het belangrijk om de hippocampus plakken leeftijd verhuurd voor 12-14 dagen voor de experimenten. Met slice isolement, is er een significant microgliale reactie, en microglia geactiveerd blijven voor enige tijd, met een terugkeer naar een rustplaats vertakte staat die zich per dag 10 in vitro3,6. Ten tweede, de gemiddelde PI fluorescentie-intensit…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gefinancierd door NINDS, American Heart Association, American Federation for Aging Research, March of Dimes
Wang, Q., Andreasson, K. The Organotypic Hippocampal Slice Culture Model for Examining Neuronal Injury. J. Vis. Exp. (44), e2106, doi:10.3791/2106 (2010).