دراسة التجانس الخلية الدبقية التأثير على النمو أكسون باستخدام أسلوب جديد Coculture
Summary
في هذا البروتوكول ، وصفت لنا طريقة جديدة لدراسة تأثير عدم التجانس الخلايا الدبقية على النمو مع محوار<em> في المختبر</em> شارك في ثقافة النظام. وكانت الفئران مثقف الخلايا الدبقية القشرية للالتقاء وcocultured عالي النقاء مع الفئران العقد الجذرية الظهرية الخلايا العصبية. وتمت مقارنة تأثير مختلف الخلايا الدبقية على التصاق الخلايا العصبية والنمو محوار مباشرة في نفس الثقافة. هذا الأسلوب يوفر طريقة جديدة لدراسة الخلية مباشرة التجانس الدبقية تؤثر على التصاق الخلايا العصبية والنمو محور عصبي.
Abstract
في الجهاز العصبي المركزي لجميع الثدييات ، المحاوير قطعت بعد اصابة غير قادر على تجديد لأهدافها الأصلية والانتعاش وظيفية سيئة للغاية 1. فشل تجديد محور عصبي هو نتيجة تضافر عوامل عدة من بينها البيئة الخلايا الدبقية معادية ، المثبطة الميلين جزيئات ذات الصلة ، وانخفضت القدرة الذاتية على التجدد الخلايا العصبية 2. النجمية هي الأكثر الغالب نوع من الخلايا الدبقية في الجهاز العصبي المركزي وتلعب دورا هاما في وظائف محوار تحت علم وظائف الأعضاء وعلم الأمراض الظروف 3. على النقيض من oligodendrocytes مثلي ، النجمية هي خلية السكان غير متجانسة تتألف من قبل مجموعات سكانية فرعية نجمية مختلفة مع morphologies متنوعة والتعبير الجيني 4. الأهمية الفنية لهذا التباين ، مثل تأثيرها على النمو المحور ، غير معروفة الى حد كبير.
لدراسة الخلايا الدبقية ، وخصوصا وظيفة نجمية عدم التجانس في سلوك الخلايا العصبية ، التي أنشئت لدينا طريقة جديدة من خلال المشاركة في استنبات الخلايا العصبية المنقى الظهرية عالية العقد الجذرية مع الخلايا الدبقية التي تم الحصول عليها من القشرة الفئران. بواسطة هذه التقنية ، تمكنا من مقارنة مباشرة التصاق الخلايا العصبية والنمو محوار على المجموعات السكانية الفرعية النجمية المختلفة في إطار نفس الشرط.
في هذا التقرير ، أن نعطي للبروتوكول مفصل لهذا الأسلوب لعزل الخلايا النجمية والثقافة ، والعزلة الجذرية الظهرية العقد العصبية وتنقيتها ، وشارك في ثقافة DRG الخلايا العصبية مع الخلايا النجمية. ويمكن أيضا هذا الأسلوب أن تمتد إلى مناطق أخرى من الدماغ لدراسة التفاعل الخلوية أو إقليمية محددة بين الخلايا العصبية والخلايا الدبقية.
Protocol
Discussion
وقد صمم هذا البروتوكول التجربة للوصول إلى هدفين لدراسة الخلايا الدبقية ، وتأثير عدم التجانس نجمية خصوصا على التصاق الخلايا العصبية والنمو neurite. وكان الهدف الأول هو الحفاظ على تجانس نجمية قدر الإمكان ، في هذه التجربة ، مختلطة متموجة ثقافة الخلية الدبقية النجمية أغنت …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذه الدراسة الجديدة FMMU إيجاد الأساس والمعاهد الوطنية للصحة التي تمول جزئيا.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM(high glucose) | Invitrogen | 10313-039 | ||
| L15 medium | Invitrogen | 11415-114 | ||
| FBS | Invitrogen | 10437-077 | ||
| Neurobasal Medium | Invitrogen | 21103-049 | ||
| poly-lysine | Sigma | P4832 | culture grade | |
| NGF(2.5S) | Invitrogen | 13257-019 | ||
| B27 supplyment | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| FUDR | Sigma | F0503 | ||
| neurofilament antibody | Abcam | ab24575 |
Riferimenti
- Rossignol, S., Schwab, M., Schwartz, M., Fehlings, M. G. Spinal cord injury: time to move?. J Neurosci. 27 (44), 11782-11792 (2007).
- Yiu, G., He, Z. Glial inhibition of CNS axon regeneration. Nat Rev Neurosci. 7 (8), 617-627 (2006).
- Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).
- Matyash, V., Kettenmann, H. Heterogeneity in astrocyte morphology and physiology. Brain Res Rev. , (2009).
- Wanner, I. B., Deik, A., Torres, M., Rosendahl, A., Neary, J. T., Lemmon, V. P., Bixby, J. L. A new in vitro model of the glial scar inhibits axon growth. Glia. 56 (15), 1691-1709 (2008).
- Kuffler, D. P., Sosa, I. J., Reyes, O. Schwann cell chondroitin sulfate proteoglycan inhibits dorsal root ganglion neuron neurite outgrowth and substrate specificity via a soma and not a growth cone mechanism. J Neurosci Res. 87 (13), 2863-2871 (2009).
- Kleitman, N., Wood, P. M., Bunge, R. P. Tissue culture method for the study of myelination. Culturing nerve cells. , P559-P559 (1998).
