Un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per In vivo Tumore Imaging e monitoraggio del tumore Risposte immunitarie
Summary
Per studiare<em> In vivo</em> La crescita tumorale e microambiente tumorale, abbiamo utilizzato un modello murino singenici e ortotopico di carcinoma ovarico negli animali immunocompetenti. Noi trasdotte un tumore linea di topi cellule (MOV1) con una proteina fluorescente Katushka (MOV1<sup> KAT</sup>) E qui vi mostriamo il suo impianto ortotopico in ovaio e<em> In vivo</em> Immagini.
Abstract
Background: Il cancro ovarico è generalmente diagnosticato in fase avanzata in cui il caso / rapporto di mortalità è alta e rimane quindi il più letale di tutte le neoplasie ginecologiche tra Stati Uniti le donne 1,2,3. Tumori sierosi sono le forme più diffuse di cancro ovarico e 4,5 il Tg-MISIIR-Tag transgenici rappresenta l'unico modello del mouse che si sviluppa spontaneamente questo tipo di tumori. Tg-MISIIR-Tag topi esprimere SV40 regione trasformando sotto il controllo del Mulleriani inibitori della sostanza di tipo II Receptor (MISIIR) del gene promotore 6. Ulteriori linee transgeniche sono state identificate che esprimono il transgene TAG SV40, ma non sviluppano tumori ovarici. Topi inclini non tumorali mostrano tipica vita per C57BL / 6 topi e sono fertili. Questi topi possono essere utilizzate come riceventi trapianto allogenico di singenici per le cellule tumorali isolate dai Tg-MISIIR-Tag-DR26 topi.
Obiettivo: Sebbene l'imaging del tumore è possibile 7, la diagnosi precoce dei tumori in profondità è una sfida in animali che vivono di piccole dimensioni. Per abilitare studi preclinici in un modello animale immunologicamente intatta per il cancro ovarico sieroso, si descrive un modello di topo singenici per questo tipo di tumore ovarico che permette di imaging in vivo, gli studi del microambiente tumorale e tumore risposte immunitarie.
Metodi: Per prima cosa deriva a + TAG cancro linea di topi cellule (MOV1) da un tumore ovarico spontanee raccolte in un 26 settimane di età DR26-Tg MISIIR-Tag femminile. Poi, abbiamo MOV1 cellule trasdotte stabilmente con TurboFP635 vettore Lentivirus mammiferi che codifica Katushka, un far-rosso mutante della proteina fluorescente rossa dal mare anemone Entacmaea quadricolor con eccitazione / emissione di massimi a 588/635 nm 8,9,10. Noi ortotopicamente impiantato MOV1 Kat nell'ovaio 11,12,13,14 della non-tumorale inclini Tg-MISIIR-Tag topi femmina. Progressione del tumore è stata seguita da in vivo imaging ottico e microambiente tumorale è stata analizzata mediante immunoistochimica.
Risultati: ortotopicamente MOV1 impiantato cellule Kat sviluppato tumori ovarici sierosi. MOV1 Kat tumori possono essere visualizzate da imaging in vivo fino a tre settimane dopo l'impianto (fig. 1) e sono stati infiltrati con leucociti, come osservato nei tumori ovarici umani 15 (fig. 2).
Conclusioni: descrivere un modello ortotopico di carcinoma ovarico adatto per imaging in vivo di tumori presto a causa della elevata pH stabilità e fotostabilità di Katushka nei tessuti profondi. Proponiamo l'utilizzo di questo modello romanzo singenici del carcinoma ovarico sieroso per gli studi di imaging in vivo e il monitoraggio dei tumori risposte immunitarie e le immunoterapie.
Protocol
Discussion
Chirurgia e iniezioni ortotopico
Iniezione ortotopico in borsa ovarica esigenze di formazione e di precisione. Così
- In caso di scarsa esperienza chirurgica, la pratica di cadaveri per primo.
- Usare preferibilmente donne multipare (uno o due cucciolate), come si sviluppano più grandi ovaie nel tempo che facilita l'iniezione e la sopravvivenza aumentano confrontare con le femmine nullipare.
- A causa delle piccole dimensioni della borsa ovarica del mouse, l…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato finanziato dalla sovvenzione NIH P01 AI 068730 (SNC, NS), il NIH concedere CA016520 / TAPITMAT (NS), il finanziamento privato da parte della Fondazione Claneil (NS), e il ovarico SPORE concedere FCCC e la University of Pennsylvania ( P50 CA83638) e il Fox Chase Cancer Center core Grant (P30 CA06927) (DCC). Gli autori ringraziano l'ottima assistenza tecnica dello strumento ottico Core / bioluminescenza diretto dal Dr. EJ Delikatny presso la University of Pennsylvania, Anthony Secreto dalle cellule staminali e Core dello xenotrapianto diretto dal Dott. G. Danet-Desnoyers presso la University of Pennsylvania Cancer Centro per la SNC formazione tecnica di iniezione ortotopica e Denada Dangaj presso l'Università della Pennsylvania / OCRC per assistere sulla chirurgia.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-GLUTAMAX | Invitrogen | 10564-011 | ||
| PBS | Gibco | 14040 | ||
| Versene | Lonza | 17-711E | ||
| Heating pad | Deltaphase | 39 DP | ||
| Povidone pads | Dynarex | 1108 | ||
| Alcohol pads | Fisher | 06-669-62 | ||
| Artificial tears ointment | Phoenix Pharma., Inc. | 17845-153 | ||
| Ketoprofen | Fort Dodge laboratories | |||
| 3cc/insulin syringe | BD | 309301 | ||
| Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm) | Syneture | 9612-31 | ||
| Tissue adhesive | Vetbond | 3M | ||
| Vet Bactrim/ oral suspension | Hi-tech Pharmacal | 840823 | ||
| IVIS-Lumina | Caliper lifesciences | |||
| Isofluorane | Phoenix Pharma., Inc. | J108013 | ||
| Fetal Bovine Serum, Qualified | Invitrogen | 10437036 | ||
| Penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| TurboFP635 mammalian vector | Evrogen | FP721 | ||
| T175 flasks | cellstar | 660-190 |
Riferimenti
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