Un modelo ortotópico de cáncer de ovario seroso en ratones inmunocompetentes para In vivo Imágenes y seguimiento de tumores de las respuestas inmunitarias del tumor
Summary
Para el estudio de<em> In vivo</em> El crecimiento del tumor y el microambiente del tumor, se utilizó un modelo de ratón y singénico ortotópico de cáncer de ovario en los animales inmunocompetentes. Nos transducidas un tumor de ratón línea celular (MOV1) con Katushka proteína fluorescente (MOV1<sup> KAT</sup>) Y aquí se muestra su implantación ortotópica en el ovario y<em> In vivo</em> Imágenes.
Abstract
Antecedentes: El cáncer de ovario se diagnostica generalmente en una etapa avanzada, donde la proporción de casos / mortalidad es alta y por lo tanto sigue siendo el más letal de todos los cánceres ginecológicos entre los EE.UU. las mujeres 1,2,3. Los tumores serosos son las formas más generalizadas de cáncer de ovario y el 4,5 transgénicos Tg-MISIIR-TAG representa el modelo de ratón sólo que de forma espontánea se desarrolla este tipo de tumores. Tg-MISIIR-TAG ratones expresan SV40 región transformación bajo control de la sustancia inhibitoria de Müller tipo de receptor II (MISIIR) promotor del gen 6. Otras líneas transgénicas se han identificado que expresan el transgén etiqueta SV40, pero no desarrollan tumores en los ovarios. No tumorales ratones propensos exhibición típica vida de los ratones C57BL / 6 y son fértiles. Estos ratones se puede utilizar como receptores de aloinjertos singénico de células tumorales aisladas de Tg-MISIIR-Tag-DR26 ratones.
Objetivo: A pesar de imagen del tumor es posible 7, la detección temprana de los tumores profundos es un reto en animales vivos pequeños. Para permitir que los estudios preclínicos en modelos animales inmunológicamente intactos para el cáncer de ovario seroso, se describe un modelo de ratón singénico para este tipo de cáncer de ovario, que permite imágenes di vivo, los estudios del microambiente del tumor y el tumor de la respuesta inmune.
Métodos: En primer lugar, obtuvo un tag + ratón línea celular de cáncer (MOV1) de un tumor ovárico espontáneo recolectadas en un 26 semanas de edad Tg-DR26 MISIIR-Tag mujeres. Luego, de forma estable transduced MOV1 células con el vector Lentivirus TurboFP635 mamíferos que codifica Katushka, un mutante rojo lejano de la proteína fluorescente roja de la anémona de mar Entacmaea quadricolor con excitación / emisión máxima a 588/635 nm 8,9,10. Hemos implantado ortotópicamente MOV1 Kat en el ovario 11,12,13,14 de no tumorales propensos Tg-MISIIR-TAG ratones hembra. La progresión del tumor fue seguido por imágenes di vivo óptica y microambiente tumoral se analizó mediante técnicas de inmunohistoquímica.
Resultados: ortotópicamente implantado células MOV1 Kat desarrollaron tumores serosos de ovario. MOV1 tumores Kat puede ser visualizado por imágenes di vivo de hasta tres semanas después de la implantación (fig. 1) y se infiltraron con los leucocitos, como se observa en el cáncer de ovario humano 15 (fig. 2).
Conclusiones: Se describe un modelo ortotópico de cáncer de ovario adecuado para imágenes di vivo de tumores antes de tiempo debido a los altos de pH estabilidad y fotoestabilidad de Katushka en los tejidos profundos. Se propone el uso de este nuevo modelo singénico de cáncer de ovario seroso en los estudios de imágenes in vivo y seguimiento de los tumores la respuesta inmune e inmunoterapias.
Protocol
Discussion
Cirugía y las inyecciones ortotópico
Inyección ortotópica en bolsa ovárica demandas de formación y precisión. Así
- En el caso de los pobres de la experiencia práctica quirúrgica, con cadáveres en primer lugar.
- Usar preferentemente mujeres multíparas (uno o dos litros) a medida que desarrollan los ovarios más grandes con el tiempo que facilita la inyección y aumentar la supervivencia de comparar con las mujeres nulíparas.
- Debido al pequeño tamaño…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por el NIH P01 AI 068.730 (SNC, NS), el NIH subvención CA016520 / TAPITMAT (NS), la financiación privada de la Fundación Claneil (NS), y el de ovario SPORE subvención a la CMCC y la Universidad de Pennsylvania ( P50 CA83638) y el Fox Chase Cancer Center núcleo Grant (P30 CA06927) (DCC). Los autores agradecen la excelente asistencia técnica del Fondo para el núcleo óptico / Bioluminiscencia dirigido por el Dr. EJ Delikatny en la Universidad de Pennsylvania Secreto, Antonio de la célula madre y Core Xenoinjerto dirigido por el Dr. G. Danet-Desnoyers en la Universidad de Pennsylvania cáncer Centro para el SNC de capacitación para la técnica de inyección ortotópica y Dangaj Denada en la Universidad de Pennsylvania / OCRC para ayudar en la cirugía.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-GLUTAMAX | Invitrogen | 10564-011 | ||
| PBS | Gibco | 14040 | ||
| Versene | Lonza | 17-711E | ||
| Heating pad | Deltaphase | 39 DP | ||
| Povidone pads | Dynarex | 1108 | ||
| Alcohol pads | Fisher | 06-669-62 | ||
| Artificial tears ointment | Phoenix Pharma., Inc. | 17845-153 | ||
| Ketoprofen | Fort Dodge laboratories | |||
| 3cc/insulin syringe | BD | 309301 | ||
| Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm) | Syneture | 9612-31 | ||
| Tissue adhesive | Vetbond | 3M | ||
| Vet Bactrim/ oral suspension | Hi-tech Pharmacal | 840823 | ||
| IVIS-Lumina | Caliper lifesciences | |||
| Isofluorane | Phoenix Pharma., Inc. | J108013 | ||
| Fetal Bovine Serum, Qualified | Invitrogen | 10437036 | ||
| Penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| TurboFP635 mammalian vector | Evrogen | FP721 | ||
| T175 flasks | cellstar | 660-190 |
Riferimenti
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