एक - पूर्व ओवो चिकन भ्रूण संस्कृति इमेजिंग और Microsurgery अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त प्रणाली
Summary
इस अनुच्छेद में, हम सक्षम लंबी अवधि के लिए एक सरल पद्धति मौजूद है<em> – पूर्व ओवो</em> एवियन भ्रूण संस्कृति. इस तकनीक अनुदैर्ध्य प्रयोग पूरी तरह ऑप्टिकल पहुँच और / या एवियन भ्रूण में बाँझ परिवहन की आवश्यकता के लिए आदर्श है.
Abstract
आनुवांशिक और microenvironmental कारकों के बीच रिश्तों कि सामान्य और विकृत भ्रूण के विकास ड्राइव को समझना नया चिकित्सात्मक रणनीतियों की खोज के लिए मौलिक है. इमेजिंग प्रौद्योगिकी के क्षेत्र में प्रगति को संगठन और शरीर की योजना के परिपक्व के मात्रात्मक जांच सक्षम है, लेकिन बाद में मंच भ्रूण morphogenesis कम स्पष्ट है. चिकन भ्रूण एक आकर्षक संस्कृति और शल्य चिकित्सा हेरफेर के अपने आसानी के कारण हड्डीवाला जानवर इस आवेदन के लिए मॉडल प्रणाली रहे हैं. प्रारंभिक भ्रूण फिल्टर पेपर के छल्ले, जो सेल patterning और भाग्य अध्ययन 1,2 के लिए पूरा ऑप्टिकल का उपयोग सक्षम बनाता है पर एक कम समय के लिए संवर्धित किया जा सकता है है. अध्ययन हृदय morphogenesis जैसे उन्नत विकास की प्रक्रिया पारंपरिक 3-5 eggshell की एक खिड़की के माध्यम से प्रदर्शन कर रहे हैं, लेकिन इस तकनीक ऑप्टिकल विंडो का आकार की वजह से उपयोग की सीमा . हम पहले से हेक्सागोनल वजन नावों पर एक सरल पूरे भ्रूण पूर्व ओवो संस्कृति विधि विकसित करने के लिए 10 दिन, जो 6,7 अल्ट्रासोनोग्राफी के माध्यम से उच्च संकल्प इमेजिंग सक्षम के लिए. इन संस्कृतियों के लिए परिवहन के लिए मुश्किल थे, इमेजिंग रहते प्रयोगों के लिए उपलब्ध उपकरणों के प्रकार सीमित है. हम यहाँ एक बेहतर खोल – कम एक लागत प्रभावी, पोर्टेबल पर्यावरण चैम्बर के साथ संस्कृति प्रणाली मौजूद है. अंडे एक polyurethane झिल्ली (लपेटो चिपटना) आंशिक रूप से बाँझ पानी से भरा एक प्लास्टिक कप के लिए circumferentially चिपका के द्वारा बनाई गई झूला पर टूट गया. झूला की परिधि और गहराई के आयामों दोनों सतह के तनाव को बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण थे, जबकि झूला और पानी के नीचे की यांत्रिकी मदद परिवहन के द्वारा प्रेरित कंपन गीला हो जाना. एक छोटा सा पानी स्नान परिसंचारी पदचिह्न भी प्रयोग के दौरान लगातार तापमान नियंत्रण सक्षम करने के लिए विकसित किया गया था. हम कम से कम 14 दिनों के लिए morphogenic दोष के बिना संस्कृति भ्रूण में इस तरह की क्षमता का प्रदर्शन या देरी और कई microsurgical और इमेजिंग अनुप्रयोगों में इस प्रणाली को रोजगार.
Protocol
Discussion
ऑप्टिकल का उपयोग करने के लिए और एवियन भ्रूण में प्रयोग भंगशील वस्तु की कमी की वजह से चुनौती दे रहा है. Windowing काफी इंजेक्शन और microsurgical 8 दृष्टिकोण के लिए सुलभ microvessels की संख्या की सीमा. केवल एक परिणाम के रूप मे…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fertile white Leghorn chicken eggs | ||||
| Model GB1, Avery Incubators, Hugo CO | ||||
| Saran Wrap | ||||
| Kimwipes | Kimberly-Clark, Inc. | |||
| Rubber bands | ||||
| Warm sterile water | ||||
| 9 oz plastic cup | ||||
| 100 mm diameter Petri dish | ||||
| 1602N thermal air | GQF Manufacturing CO, Savannah GA | |||
| Fluorescein-conjugated dextran (2 MDa, 1% w/v in phosphate buffered saline) | Sigma Aldrich Inc. | |||
| Microforge | Glassworx, Inc, St Louis MO | |||
| Glass capillary tubes (0.75 mm ID) | ||||
| Micromanipulator | World Precision Instruments, Sarasota FL | Model M3301L | ||
| Fluorescent microscopy | Zeiss | Z20 | ||
| Fine 55-forceps | World Precision Instruments, Sarasota FL | |||
| 10-0 nylon surgical suture | Ethicon | |||
| Tubing | VWR | 1mm OD | ||
| 3 mL syringe | BD | |||
| 200 μL pipetter and pipette tips | VWR |
References
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