Anopheles stephensi myggor är vektorer för malaria lever Indien och hela Asien. Denna video visar en teknik för att utföra microinjections av denna art med transgener som ger resistens mot malaria till mygga. Mycket av de metoder som visat i den här videon är tillämplig på mikroinjektion tekniker av andra myggarter.
Abstract
Införandet av exogena gener i kartläggningen av myggor kräver mikroinjektion tekniker anpassade till specifika arter av intresse. Denna video protokoll visar en metod som James laboratoriet för att microinject DNA-konstruktioner i Anopheles stephensi embryon för generering av förvandlade myggor. Tekniker för att förbereda mikroinjektion nålar, samla in och förbereda embryon och utföra mikroinjektion illustreras.
Protocol
Preparat i förväg mikroinjektion: Blod foder myggor: för injektion från måndag till onsdag mata honorna på föregående fredag. Att injicera torsdag och fredag, foder honor på måndagen i samma vecka. Förbered Quartz nålar med hjälp av programmet 2 och isoton buffert (se material). "Att lägga röret" för embryon är den vanliga Drosophila kulturen flaskan. Blöt bomull i botten, med en våt disk av filtrerpapper som täcker det. </l…
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
Injection Quartz needles
Sutter Instrument
O.D.- 1.0 mm, I.D.-0.70, 10 cm length, are prepared by drawing capillary tubing into a fine 3-8 um with a shaft of approximately 100-300 mm micropipette puller.
Terenius, O., Juhn, J., James, A. A. Injection of An. stephensi Embryos to Generate Malaria-resistant Mosquitoes. J. Vis. Exp. (5), e216, doi:10.3791/216 (2007).