Préparation des tendons de queue de rat pour les études biomécaniques et mécanobiologique
Summary
Cet article décrit les procédures expérimentales utilisées pour préparer les tendons de queue de rat pour les études biomécaniques et mécanobiologique. Plusieurs caractéristiques des principales étapes de préparation sont démontrées, à commencer par l'extraction, la mesure de la superficie transversale, le rinçage et le chargement dans la chambre de bioréacteur.
Abstract
Tendons de queue de rat (RTT) sont un modèle commun biologiques utilisés dans études expérimentales in vitro dans les domaines de la physiologie des tendons et des tendinopathies. Travailler avec ces tissus est difficile car ils sont très fragiles, et jusqu'à présent il n'y avait pas de protocole rigoureusement détaillées de leur isolement.
Face à ces défis, nous avons développé des méthodes et des instruments pour faciliter la manipulation des RTT et des tissus de contrôle de viabilité, la stérilité et l'intégrité. Cet article décrit les procédures expérimentales utilisées pour préparer RTT pour les études biomécaniques et mécanobiologique. Notre travail est divisé en quatre grandes étapes: l'extraction, la mesure de la superficie transversale, le rinçage et le chargement dans la chambre de bioréacteur.
A chaque étape, toutes les procédures, les matériaux et les manipulations sont présentés en détail afin qu'ils puissent être facilement reproduits. Par ailleurs, les instruments spécifiques développés sont présentés: une plaque de manipulation utilisée pour séparer RTT, un micromètre optique à la position du tissu pendant la mesure de la superficie transversale et un système d'ancrage pour attacher les RTT sur un bioréacteur.
Enfin, nous décrivons les résultats obtenus après plusieurs tests afin de valider nos méthodes. Évaluations de la viabilité, la stérilité et l'intégrité de démontrer que nos procédures sont suffisamment rigoureux pour les manipulations des tissus fragiles tels que les tendons de queue de rat.
Protocol
Discussion
En appliquant ces procédures expérimentales, nous pouvons mener une grande variété d'études di vitro sur ce type de tissus. Comme par exemple, une étude sur la dégénérescence des tissus a été réalisée par l'application de la sous-stimulation à la RTT, pour une période de dix jours. Chaque jour, nous avons évalué les propriétés mécaniques dans les tissus des essais non destructifs de relaxation des contraintes. A la fin, nous avons pu observer des variations de stress RTT et …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cet article a été appuyé par le CRSNG # 299280 Grant, IRSST comme une bourse d'études pour les parents et le FRSQ G. comme une bourse de recherche étudiant de premier cycle à M. Cyr. Nous remercions Yoan Lemieux-Laneville pour effectuer les manipulations enregistrées sur vidéo.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| D-PBS | Reagent | Wisent inc. | 311-410-CL | Saline solution |
| Glucose | Reagent | Wisent inc. | 609-037-EL | Saline solution
1g/L |
| Antibiotics-antimycotics | Reagent | Invitrogen Corp. | 15240-062 | Saline solution
1% |
| DMEM | Reagent | Invitrogen Corp. | 12800-017 | Culture solution |
| Sodium Bicarbonate | Reagent | Wisent inc. | 600-105-CG | Culture solution 3.7g/L |
| FBS | Reagent | Wisent inc. | 090150 | Culture solution 10% |
| Antibiotics-antimycotics | Reagent | Invitrogen Corp. | 15240-062 | Culture solution 1% |
| Optic Micrometer | Tool | Custom-made | ||
| Manipulation plate | Tool | Custom-made | ||
| Bioreactor chamber | Tool | Custom-made |
Riferimenti
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