Beredning av senor Rat Tail för biomekaniska och Mechanobiological Studier
Summary
Den här artikeln beskriver de experimentella metoder som används för att förbereda senor råtta svans för biomekaniska och mechanobiological studier. Flera funktioner av de viktigaste stegen för att förbereda påvisas, börjar med utvinning, tvärsnittsarea mätning, sköljning och lastning i bioreaktor kammaren.
Abstract
Rat svans senor (RTTS) är en gemensam biologisk modell som används i experimentella in vitro-studier inom senan fysiologi och tendinopati. Att arbeta med dessa vävnader är en utmaning eftersom de är mycket bräckliga, och fram tills nu fanns det ingen rigoröst detaljerat protokoll för deras isolering.
Inför dessa utmaningar har vi utvecklat metoder och instrument för att underlätta hantering av RTTS och kontroll vävnad livskraft, sterilitet och integritet. Den här artikeln beskriver de experimentella metoder som används för att förbereda RTTS för biomekaniska och mechanobiological studier. Vårt arbete är uppdelat i fyra steg: brytning, tvärsnittsarea mätning, sköljning och lastning i bioreaktor kammaren.
Vid varje steg är alla procedurer, material och manipulationer presenteras i detalj, så att de lätt kan reproduceras. Dessutom är de specifika utvecklat instrument presenteras: en manipulation plåt som används för att avskilja RTTS, till en optisk mikrometer för att placera vävnaden under tvärsnittsarea mätning och ett förankringssystem fästa RTTS på en bioreaktor.
Slutligen beskriver vi de resultat som uppnåtts efter flera tester för att validera våra metoder. Genomförbarhet, sterilitet och integritet utvärderingar visar att våra rutiner är tillräckligt stränga för manipulationer av ömtåliga vävnader såsom senor råtta svans.
Protocol
Discussion
Genom att tillämpa de experimentella procedurer, kan vi göra ett brett utbud av in vitro-studier på denna typ av vävnader. Som till exempel, var en studie om vävnad degeneration genomförs genom tillämpning av under-stimulans för att RTTS under en period av tio dagar. Varje dag, utvärderade vi vävnad mekaniska egenskaper i oförstörande stresstester avkoppling. Till slut kunde vi konstatera RTT stressen variation och därmed analysera utvecklingen av mekaniska egenskaper.
<…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Denna artikel har stöd av NSERC Grant # 299.280, IRSST som ett stipendium till G. Förälder och FRSQ som en doktorand Research Award till M. Cyr. Vi tackar Yoan Lemieux-Laneville för att utföra manipulationer inspelade på video.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| D-PBS | Reagent | Wisent inc. | 311-410-CL | Saline solution |
| Glucose | Reagent | Wisent inc. | 609-037-EL | Saline solution
1g/L |
| Antibiotics-antimycotics | Reagent | Invitrogen Corp. | 15240-062 | Saline solution
1% |
| DMEM | Reagent | Invitrogen Corp. | 12800-017 | Culture solution |
| Sodium Bicarbonate | Reagent | Wisent inc. | 600-105-CG | Culture solution 3.7g/L |
| FBS | Reagent | Wisent inc. | 090150 | Culture solution 10% |
| Antibiotics-antimycotics | Reagent | Invitrogen Corp. | 15240-062 | Culture solution 1% |
| Optic Micrometer | Tool | Custom-made | ||
| Manipulation plate | Tool | Custom-made | ||
| Bioreactor chamber | Tool | Custom-made |
Riferimenti
- Bennett, M. B., Ker, R., Dimery, N., Alexander, R. Mechanical properties of various mammalian tendons. J. Zool. Lond. A209, 537-548 (1986).
- Dupuis, D. . Déshydratation de matrices collagéniques reconstruites in vitro: effets sur les propriétés mécaniques et histologiques [dissertation]. , 114-114 (1981).
- Haut, R. C. Age-dependent influence of strain rate on the tensile failure of rat tail tendon. Journal of Biomechanical Engineering. 105, 296-299 (1983).
- Huppé, N., Lessard, J. -. L., Langelier, E. A Bioreactor Design for the Mechanobiological Study of Soft Tissue Damage and Repair in Conditions that Provide the Best Approximation of Actual Use. , (1985).
- Langelier, E., Dupuis, D., Guillot, M., Goulet, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Rancourt, D. Cross-sectional profiles and volume reconstructions of soft tissues using laser beam measurements. J Biomech Eng. 126, 796-802 (2004).
- Lee, T. Q., Woo, S. L. -. Y. A new method for determining cross-sectional shape and area of soft tissues. J Biomech Eng. 110, 110-114 (1988).
- Parent, G., Cyr, M., Cousineau-Pelletier, P., Desbiens-Blais, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Langelier, E. Current Techniques for the Evaluation of Cross-Sectional Area in Rat Tail Tendons Generate Significant Errors. , (1985).
