Intravital المجهري للماوس دوران الأوعية الدقيقة الدماغ باستخدام نافذة مغلقة القحف
Summary
Intravital المجهري لمتابعة الأحداث الزمانية والمكانية الدورة الدموية والتهابات في دوران الأوعية الدقيقة حنوني.
Abstract
وقد صمم هذا النموذج التجريبي لتقييم دوران الأوعية الدقيقة الماوس حنوني خلال الدورة الدموية ، الحادة والمزمنة والفسيولوجية والمرضية في جسم المريض ، وظروف التهابات والأيض ، وذلك باستخدام المجهر مضان في الجسم الحي. وضعت نافذة مغلقة في الجمجمة خلال القشرة الجداري القذالي الأيسر من الفئران. يتم تسجيل دوران الأوعية الدقيقة المحلية في الوقت الحقيقي من خلال النافذة باستخدام برنامج التحصين الموسع وإنارة مضان ، وقياسات للأقطار السفن وخلايا الدم الحمراء (RBC) يتم تنفيذ سرعات. ويتم قياس سرعة RBC في الوقت الحقيقي باستخدام عبر ارتباط و / أو كرات الدم الحمراء التي تحمل علامات الفلورسنت. تصنع الكريات البيضاء والصفائح الدموية الانضمام للسفن حنوني وتقييم نضح وتسرب الأوعية الدموية مع مساعدة من علامات مضان المسمى مثل الأجسام المضادة الزلال ، ومعاداة FITC TxR CD45. يمكن أن يكون دوران الأوعية الدقيقة مرارا الفيديو المسجلة على مدى عدة أيام. استخدمنا لأول مرة في الدماغ نافذة المجهري intravital قريبة من دراسة دوران الأوعية الدقيقة حنوني لمتابعة التغيرات الدينامية خلال عدوى المتصورة أنكا berghei في الفئران وتبين أن يرتبط التعبير عن CM مع الاختلالات microcirculatory يتميز تضيق الأوعية ، وانخفاض عميقة في الدم تدفق الأوعية الدموية ، والانهيار في نهاية المطاف.
Protocol
Discussion
الأسلوب المجهري intravital الموصوفة هنا يوفر أداة فريدة وقوية لرصد تفصيلي للدوران الأوعية الدقيقة حنوني في الماوس. أنها تسمح استفراد فرد الشرايين والأوردة وقياس التغيرات في عدد من المعلمات مثل أقطار السفينة ، RBC السرعات ، وتدفق الدم ، والالتزام والمتداول من الكريات البي…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل عن طريق منح R01 – HL87290 ، R01 – S1 HL87290 وR01 – AI082610 من المعاهد الوطنية للصحة لLJMC.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane | Baxter | FDG9623 | ||
| Carbocyanine dye Dil | Molecular Probes | D306 | ||
| Albumin-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 | ||
| Anti-CD45-TxR Ab | Invitrogen | MCD4517 | ||
| P. berghei ANKA-GFP | MR4 | MRA-865 |
Riferimenti
- Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging. J. Vis. Exp. (15), (2008).
- Intaglietta, M., Tompkins, W. R. Microvascular measurements by video image shearing and splitting. Microvasc. Res. 5, 309-312 (1973).
- Briceno, J. C., Cabrales, P., Tsai, A. G., Intaglietta, M. Radial displacement of red blood cells during hemodilution and the effect on arteriolar oxygen profile. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1223-1228 (2004).
- Bishop, J. J., Nance, P. R., Popel, A. S., Intaglietta, M., Johnson, P. C. Relationship between erythrocyte aggregate size and flow rate in skeletal muscle venules. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, H113-120 (2004).
- Baldwin, A. L. Modified hemoglobins produce venular interendothelial gaps and albumin leakage in the rat mesentery. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 277, H650-H659 (1999).
- Cabrales, P., Zanini, G. M., Meays, D., Frangos, J. A., Carvalho, L. J. Murine cerebral malaria is associated with a vasospasm-like microcirculatory dysfunction, and survival upon rescue treatment is markedly increased by nimodipine. Am. J. Pathol. 176 (3), 1306-1315 (2010).
