Microscopie intravitale de la microcirculation cérébrale souris en utilisant une fenêtre fermée crânienne
Summary
Microscopie intravitale à suivre spatiale et temporelle des événements hémodynamiques et inflammatoires dans la microcirculation piales.
Abstract
Ce modèle expérimental a été conçu pour évaluer la microcirculation souris piales cours aiguës et chroniques, hémodynamiques physiologiques et physiopathologiques, maladies inflammatoires et métaboliques, à l'aide de la microscopie par fluorescence in vivo. Une fenêtre fermée crânienne est placé sur la gauche du cortex pariéto-occipitale de la souris. Microcirculation locale est enregistrée en temps réel à travers la fenêtre en utilisant le PEV et d'illumination par fluorescence, et des mesures de diamètres des navires et des globules rouges (GR) les vitesses sont effectuées. Vitesse de RBC est mesurée à l'aide en temps réel de corrélation croisée et / ou érythrocytes marqués par fluorescence. L'adhésion leucocytaire et plaquettaire aux navires piales et l'évaluation de la perfusion et les fuites vasculaires sont faites avec l'aide de marqueurs marqué par fluorescence tels que les anticorps d'albumine-FITC et anti-CD45-TXR. Microcirculation peut être à plusieurs reprises enregistrées sur vidéo pendant plusieurs jours. Nous avons utilisé pour la première fois la microscopie intravitale fermer la fenêtre du cerveau pour étudier la microcirculation piales de suivre les changements dynamiques au cours de Plasmodium berghei ANKA l'infection chez la souris et montrent que l'expression de la CM est associée à des dysfonctionnements microcirculatoires caractérisé par une vasoconstriction, une diminution profonde dans le sang de flux et de l'effondrement à terme vasculaires.
Protocol
Discussion
La méthode décrite ici microscopie intravitale fournit un outil unique et puissant pour l'observation détaillée de la microcirculation piales chez la souris. Il permet singulariser artérioles et veinules individuels et de mesurer les changements d'un certain nombre de paramètres tels que diamètre des vaisseaux, des vitesses de RBC, le flux sanguin, l'adhérence et le laminage des leucocytes, des plaquettes et d'autres éléments du sang, des fuites vasculaires, le pH et pO2 tissus et potentielleme…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par des subventions R01-HL87290, R01-HL87290-S1 et R01-AI082610 du National Institutes of Health aux LJMC.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane | Baxter | FDG9623 | ||
| Carbocyanine dye Dil | Molecular Probes | D306 | ||
| Albumin-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 | ||
| Anti-CD45-TxR Ab | Invitrogen | MCD4517 | ||
| P. berghei ANKA-GFP | MR4 | MRA-865 |
Riferimenti
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