Intravital Mikroskopi av Mouse Brain Mikrocirkulationen hjälp av ett slutet Kraniell fönster
Summary
Intravital mikroskopi för att följa tid och rum hemodynamiska och inflammatoriska händelser i pial mikrocirkulationen.
Abstract
Denna experimentella modellen var utformad för att utvärdera musen pial mikrocirkulationen under akut och kronisk, fysiologiska och patofysiologiska hemodynamisk, inflammatoriska och metabola förhållanden, med hjälp av in vivo fluorescensmikroskopi. En stängd kraniell fönster placeras över vänster parieto-occipital cortex av möss. Lokala mikrocirkulation registreras i realtid genom fönstret med hjälp av EPI och fluorescens belysning, och mätningar av fartyg diameter och röda blodkroppar (RBC) hastigheter utförs. RBC hastighet mäts med hjälp av realtids korskorrelation och / eller fluorescerande-märkta erytrocyter. Leukocyter och trombocyter anslutning till pial fartyg och utvärdering av perfusion och vaskulärt läckage görs med hjälp av fluorescens-märkta markörer som albumin-FITC och anti-CD45-TxR antikroppar. Mikrocirkulation kan vara flera gånger video-inspelade under flera dagar. Vi använde för första gången den nära fönstret hjärnan intravital mikroskopi för att studera pial mikrocirkulationen att följa dynamiska förändringar under loppet av Plasmodium berghei ANKA infektion hos möss och visar att uttrycket av CM förknippas med mikrocirkulationen dysfunktioner kännetecknas av vasokonstriktion, kraftig minskning i blodet flöde och så småningom vaskulär kollaps.
Protocol
Discussion
Den intravital mikroskopi metod som beskrivs här ger ett unikt och kraftfullt verktyg för detaljerad observation av pial mikrocirkulationen i musen. Det gör att peka ut enskilda arterioler och venoler och mäta förändringar av ett antal parametrar som fartyget diametrar, RBC hastigheter, blodflöde, följsamhet och rullande av leukocyter, trombocyter och andra element blod, vaskulärt läckage, vävnad pH och pO2 och potentiellt många andra applikationer. In vivo-vaskulära svar kan utredas omgående på …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete har finansierats med bidrag R01-HL87290, R01-HL87290-S1 och R01-AI082610 från National Institutes of Health till LJMC.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane | Baxter | FDG9623 | ||
| Carbocyanine dye Dil | Molecular Probes | D306 | ||
| Albumin-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 | ||
| Anti-CD45-TxR Ab | Invitrogen | MCD4517 | ||
| P. berghei ANKA-GFP | MR4 | MRA-865 |
Riferimenti
- Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging. J. Vis. Exp. (15), (2008).
- Intaglietta, M., Tompkins, W. R. Microvascular measurements by video image shearing and splitting. Microvasc. Res. 5, 309-312 (1973).
- Briceno, J. C., Cabrales, P., Tsai, A. G., Intaglietta, M. Radial displacement of red blood cells during hemodilution and the effect on arteriolar oxygen profile. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1223-1228 (2004).
- Bishop, J. J., Nance, P. R., Popel, A. S., Intaglietta, M., Johnson, P. C. Relationship between erythrocyte aggregate size and flow rate in skeletal muscle venules. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, H113-120 (2004).
- Baldwin, A. L. Modified hemoglobins produce venular interendothelial gaps and albumin leakage in the rat mesentery. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 277, H650-H659 (1999).
- Cabrales, P., Zanini, G. M., Meays, D., Frangos, J. A., Carvalho, L. J. Murine cerebral malaria is associated with a vasospasm-like microcirculatory dysfunction, and survival upon rescue treatment is markedly increased by nimodipine. Am. J. Pathol. 176 (3), 1306-1315 (2010).
