सह - संस्कृति के मॉडल Pseudomonas aeruginosa Biofilms लाइव मानव Airway कक्ष पर बढ़ी
Summary
इस कागज बढ़ रही है की विभिन्न विधियों का वर्णन<em> Pseudomonas aeruginosa</em> सभ्य मानव airway उपकला कोशिकाओं पर biofilms. इन प्रोटोकॉल के लिए biofilm गठन की biofilm के दृश्य सहित विभिन्न पहलुओं का अध्ययन, biofilm के धुंधला हो जाना, biofilm की इकाइयों (CFU) के गठन कॉलोनी को मापने, और biofilm cytotoxicity का अध्ययन करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है.
Abstract
बैक्टीरियल biofilms विभिन्न मानव रोगों की एक संख्या के साथ संबद्ध किया गया है, लेकिन biofilm विकास आम तौर पर गैर रहने वाले सतहों पर अध्ययन किया गया है है. इस पत्र में, हम मानव airway उपकला कोशिकाओं (CFBE सेल) संस्कृति में विकसित पर बनाने Pseudomonas aeruginosa biofilms के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन . पहली विधि (स्टेटिक Biofilm सह संस्कृति मॉडल करार दिया) पी. aeruginosa CFBE मानक टिशू कल्चर प्लेटों पर मिला हुआ monolayers के रूप में विकसित कोशिकाओं के साथ incubated है. हालांकि जीवाणु काफी उपकला कोशिकाओं को विषाक्त है, arginine देरी monolayer के विनाश के अलावा काफी लंबे समय CFBE कोशिकाओं पर biofilms के लिए फार्म करने के लिए. दूसरा (फ्लो सेल Biofilm सह संस्कृति मॉडल करार दिया) विधि, एक biofilm प्रवाह सेल तंत्र, है जो अक्सर में biofilm, अनुसंधान प्रयोग किया जाता है एक गिलास CFBE कोशिकाओं के एक मिला हुआ monolayer समर्थन coverslip समायोजित के अनुकूलन शामिल है. इस monolayer पी. साथ inoculated है aeruginosa और एक क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप फिर कोशिकाओं भर में ताजा माध्यम से बहती है . दोनों प्रणालियों में, जीवाणु biofilms टीका के बाद 6-8 घंटे के भीतर के रूप में. Biofilm के विज़ुअलाइज़ेशन पी. के उपयोग के द्वारा बढ़ाया है aeruginosa उपभेदों constitutively हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) व्यक्त. स्टेटिक और फ्लो सेल सह संस्कृति Biofilm assays जल्दी पी. के लिए मॉडल प्रणाली सिस्टिक फाइब्रोसिस (CF), फेफड़े, और इन तकनीकों का aeruginosa संक्रमण पी. के विभिन्न पहलुओं की अनुमति aeruginosa biofilm गठन और डाह biofilm cytotoxicity, biofilm CFU की माप, और धुंधला हो जाना और visualizing biofilm सहित अध्ययन करने के लिए,.
Protocol
Discussion
Biofilms बैक्टीरिया के समुदायों है कि पर्यावरण stimuli करने के लिए प्रतिक्रिया में फार्म हैं. ये पर्यावरण संकेतों प्रत्येक जीवाणु के भीतर वैश्विक विनियामक परिवर्तन, एक सतह, एकत्रीकरण, exopolysaccharides के उत्पादन, और वृद?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम मार्गदर्शन और सुझावों के लिए इन मॉडलों को विकसित करने में जी हे Toole धन्यवाद देना चाहूंगा. इस काम सिस्टिक फाइब्रोसिस फाउंडेशन (ANDERS06F0 GGA STANTO07RO, और बास के लिए STANTO08GA करने के लिए), राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के (T32A107363 GGA और बास R01-HL074175) के द्वारा समर्थित किया गया था, और अनुसंधान संसाधन केंद्र के लिए जैव चिकित्सा अनुसंधान उत्कृष्टता के लिए राष्ट्रीय केन्द्र (बास P20-RR018787 Cobre).
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| FCS2 (Focht Live-Cell) chamber | Bioptechs, Butler, PA | 060319131616 | ||
| FCS2 chamber controller | Bioptechs, Butler, PA | 060319-2-0303 | ||
| 40 mm glass coverslips | Bioptechs, Butler, PA | PH 40-1313-0319 | ||
| MEM | Mediatech, Manassass, VA | #10-010-CV | ||
| MEM without phenol red | Mediatech, Manassass, VA | Mediatech, Manassass, VA |
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