اختبار نشاط Protozoacidal من يجند - lytic هضميدات ضد النمل الأبيض غوت البروتوزوا في المختبر (الثقافة البروتوزوا) و في الجسم الحي (Microinjection في المعى المؤخر النمل الأبيض)
Summary
نقدم إجراءات لإثبات أن يغاندس ربط غشاء سطح هذه هضم السليولوز الأوليات في أمعاء النمل الأبيض الفرموزية الجوفية باستخدام المجهر الفلورسنت ويغاندس أن يقترن الببتيدات lytic تقتل البروتوزوا<em> في المختبر</em> (البروتوزوا اللاهوائية الثقافة) و<em> في الجسم الحي</em> (الحقن في المعى المؤخر النمل الأبيض).
Abstract
نحن نعمل على تطوير مقاربة جديدة لمكافحة النمل الأبيض الجوفية التي من شأنها أن تؤدي إلى تقليل الاعتماد على استخدام المبيدات الكيماوية. النمل الأبيض الجوفية التي تعتمد على الأوليات في hindguts العمال في هضم الخشب بكفاءة. وقد تبين أن الببتيدات Lytic لقتل مجموعة متنوعة من الطفيليات (Mutwiri آخرون 2000) والبروتوزوا أيضا في أمعاء النمل الأبيض والجوفية الفرموزية ، Coptotermes formosanus (Husseneder وكولير 2009). الببتيدات Lytic هي جزء من الجهاز المناعي اللانوعي من حقيقيات النوى ، وتدمير الأغشية من الكائنات الحية الدقيقة (Leuschner وهانسيل 2004). الببتيدات معظم lytic ليس من المرجح أن يضر ارتفاع حقيقيات النوى ، لأنها لا تؤثر على حيادية كهربائيا أغشية الخلايا التي تحتوي على الكوليسترول العالي حقيقيات النوى (Javadpour وآخرون 1996). ويمكن توجيه عمل Lytic الببتيد لأنواع معينة من الخلايا من خلال إضافة ليجند. على سبيل المثال ، أفادت هانسيل وآخرون (2007) التي يمكن استخدامها الببتيدات lytic مترافق مع يغاندس سرطان الخلايا مستقبلات الغشاء لتدمير خلايا سرطان الثدي ، في حين أن الببتيدات lytic وحدها أو مترافق مع الببتيدات غير محددة لم تكن فعالة. الببتيدات Lytic كما تم مترافق للهرمونات البشرية التي تربط لمستقبلات على خلايا الورم لتدمير تستهدف خلايا البروستات وسرطان الخصية (Leuschner وهانسيل 2004).
في هذا المقال نقدم التقنيات المستخدمة للتدليل على وجود نشاط protozoacidal الببتيد lytic (هيكات) إضافة إلى يجند ببتيد سباعي الذي يربط لغشاء سطح البروتوزوا من أمعاء النمل الأبيض والجوفية الفرموزية. هذه التقنيات تشمل استئصال الأمعاء من العمال النمل الأبيض ، والثقافة اللاهوائي للأمعاء البروتوزوا (Pseudotrichonympha grassii ، Holomastigotoides hartmanni ،
Spirotrichonympha leidyi) ، وتأكيد أن يجند المجهرية التي تحمل صبغة الفلورسنت بربط الأمعاء النمل الأبيض وغيرها من الأوليات حرة المعيشة البروتوزوا ولكن ليس للبكتيريا أو أنسجة الأمعاء. نظهر أيضا أن يجند نفسه بالإضافة إلى الببتيد lytic يقتل بكفاءة الأمعاء البروتوزوا النمل الأبيض في المختبر (الثقافة البروتوزوا) والحية (microinjection في المعى المؤخر العمال) ، ولكن أقل من الببتيد bacteriacidal lytic وحدها. خسارة يؤدي إلى موت الكائنات ذات الخلية الواحدة من النمل الأبيض في أقل من أسبوعين.
في المستقبل ، فإننا سوف مهندس وراثيا الكائنات الحية الدقيقة التي يمكن أن يعيش النمل الأبيض في المعى المؤخر وينتشر عن طريق مستعمرة النمل الأبيض بأنه "حصان طروادة" للتعبير عن يجند – lytic الببتيدات التي من شأنها أن تقتل الطفيليات في الأمعاء النمل الأبيض ، وقتل لاحقا في مستعمرة النمل الأبيض . يجند – lytic الببتيدات يمكن أيضا أن تكون مفيدة لتطوير العقاقير لمكافحة الطفيليات.
Protocol
Discussion
وقد يجند – lytic الببتيدات استخدمت بنجاح لهدف على نحو فعال وتدمير الخلايا السرطانية (هانسيل وLeuschner 2004 ، هانسيل وآخرون 2007). بناء على هذا المفهوم ، قمنا بتطوير يجند ببتيد سباعي التي تربط إلى سطح الأوليات في أمعاء النمل الأبيض الفرموزية الجوفية وبالإضافة إلى الببتيد lyt…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر الدكتور أليسون ريتشارد ، المدير السابق للمنشأة الببتيد LSU لتوليف يجند الفلورسنت ، ومركز لبحوث التكنولوجيا الحيوية Interdisciplinaray ، الجبهة المتحدة لتركيب الببتيد يجند – lytic ، ومرفق مجهر سوكولوفسكي لتوفير الوصول إلى مضان المجاهر. تم توفير التمويل من قبل برنامج التنمية SERDP الاستكشافية (SEED) في وزارة الدفاع ، وزارة الطاقة ووكالة حماية البيئة ، والتكنولوجيا الحيوية AgCenter برنامج الفريق المتعدد الاختصاصات واية لويزيانا.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sigmacote | Sigma Aldrich | SL-2 | ||
| EDANS | Novabiochem | |||
| Anaerobic glove box | Coy Laboratories, Inc. | Custom made | ||
| Intellus environmental controller | Percival | I36NL | ||
| PC-10 Glass micropipette puller | Narishige Scientific Instrument Lab | PC-10 | ||
| Glass needles (Model GD-1, 1 X 900 mm) | Narishige Scientific Instrument Lab | GD-1 | ||
| Leitz micromanipulators | Vermont Optechs, Inc. | ACS01 | ||
| Microinjector | Tritech Research, Inc. | MINJ-1 | ||
| Microcaps | Drummond Scientific Company | 1-000-0005 | ||
| LEICA fluorescence imaging system | Leica | DMRxA2 | ||
| LEICA dissecting scope | Leica | MZ16 | ||
| LEICA microscope | Leica | DMLB | ||
| Olympus dissecting scope | Olympus | SZ61 |
Riferimenti
- Hansel, W., Leuschner, C., Enright, F. Conjugates of lytic peptides and LHRH or βCG target and cause necrosis of prostate cancers and metastases. Mol. Cell. Endocrinol. 269, 26-33 (2007).
- Husseneder, C., Collier, R. E., Bourtzis, K., Miller, T. A. Paratransgenesis for termite control. Insect Symbiosis. 3, 361-376 (2009).
- Husseneder, C., Grace, J. K., Oishi, D. E. Use of genetically engineered bacteria (Escherichia coli) to monitor ingestion, loss and transfer of bacteria in termites. Curr. Microbiol. 50, 119-123 (2005).
- Husseneder, C., Grace, J. K. Genetically engineered termite gut bacteria deliver and spread foreign genes in termite colonies. Appl. Microbiol. Biotechnol. 68, 360-367 (2005).
- Javadpour, M. M., Juban, M. M., Lo, W. C., Bishop, S. M., Alberty, J. B., Cowell, S. M., Becker, C. L., Mc Laughlin, M. L. De novo antimicrobial peptides with low mammalian cell toxicity. J. Med. Chem. 39, 3107-3113 (1996).
- Lai, P. Y., Tamashiro, M., Fuji, J. K. Abundance and distribution of the three species of symbiotic protozoa in the hindgut of Coptotermes formosanus (Isoptera). Proc. Haw. Entomol. Soc. 24, 271-276 (1983).
- Leuschner, C., Hansel, W. Membrane disrupting lytic peptides for cancer treatments. Curr. Pharm. Des. 10, 2299-2310 (2004).
- Mutwiri, G. K., Henk, W. G., Enright, F. M., Corbeil, L. B. Effect of the Antimicrobial Peptide, d-Hecate, on Trichomonads. J. Parasitol. 86, 1355-1359 (2000).
- Trager, W. The cultivation of a cellulose-digesting flagellate, Trichomonas termopsidis, and of certain other termite protozoa. Biol. Bull. 66, 182-190 (1934).
