Questo articolo si propone di descrivere in modo graduale comunemente usato In vitro I test eseguiti nello studio delle cellule di Schwann-asrtocyte interazioni.
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Articolo metodologico
Analisi di Schwann-astrociti Interazioni utilizzo In Vitro Saggi
In questo articolo
Sommario
Abstract
Cellule di Schwann sono una delle celle utilizzate nelle strategie di riparazione dopo le lesioni del midollo spinale. Cellule di Schwann sono in grado di supportare la rigenerazione assonale e germinazione da 1,2 secernono fattori di crescita e fornendo la promozione della crescita molecole di adesione 3 e molecole della matrice extracellulare 4. Inoltre essi mielinizzare gli assoni demielinizzati nel sito di lesione 5.
Tuttavia dopo il trapianto, le cellule di Schwann non migrano dal sito di impianto e non si mescolano con il astrociti ospite 6,7. Ciò si traduce nella formazione di un confine netto tra le cellule di Schwann e gli astrociti, creando un ostacolo per gli assoni in crescita cercando di uscire dal retro innesto nel tessuto ospite prossimale e distale. Astrociti in contatto con le cellule di Schwann anche subire l'ipertrofia e up-regolazione delle molecole inibitori 8-13.
Test in vitro sono stati utilizzati per modellare cellule di Schwann-astrociti interazioni e sono stati importanti per capire il meccanismo alla base del comportamento cellulare.
Questi test in vitro includono test di confine, dove viene effettuata una co-coltura con due cellule diverse con ogni tipo di cellula che occupa diversi territori con solo un piccolo spazio che separa i due fronti della cella. Come le cellule si dividono e migrano, i due fronti cellulare avvicinarsi gli uni agli altri e, infine, si scontrano. Questo consente il comportamento delle due popolazioni cellulari da analizzare al confine. Un'altra variante della stessa tecnica è quello di mescolare le due popolazioni cellulari in coltura e nel corso del tempo i due tipi di cellule segregare con le cellule di Schwann insieme a blocchi come isole in mezzo astrociti insieme creazione di più di Schwann-astrociti confini.
Secondo test utilizzato per studiare l'interazione di due tipi di cellule è il test di migrazione in cui il movimento cellulari possono essere rintracciati sulla superficie del tipo di cellula monostrato 14,15. Questo test è comunemente noto come test coprioggetto invertita. Cellule di Schwann sono coltivati su piccoli frammenti di vetro e sono invertiti a faccia in giù sulla superficie dei monostrati astrociti e la migrazione viene valutata dal bordo del vetrino.
Entrambi i saggi sono stati strumentali per lo studio dei meccanismi connessi alla esclusione cellulare e la formazione di confine. Alcune delle molecole identificate utilizzando queste tecniche includono N-caderine 15, proteoglicani Condroitin Solfato (CSPGs) 16,17, FGF / eparina 18, Ef / efrine 19.
Questo articolo si propone di descrivere test confine e il dosaggio della migrazione in modo graduale e chiarire gli eventuali problemi tecnici che potrebbero verificarsi.
Protocollo
1. Contorno di analisi:
- Preparazione di base: le diapositive Camera sono rivestiti con poli-D-lisina vetrini durante la notte e sterile vengono preparati prima di iniziare l'esperimento. Terreno è preparato utilizzando Media Dulbecco Modified Eagle (DMEM), integrato con il 10% di siero fetale bovino (FCS), e 1% di penicillina-streptomicina-Fungizon (FPF). Anche una bottiglia di calcio / magnesio soluzione salina bilanciata libero Hanks (HBSS) è preparato.
- Primarie di cellule di Schwann ratto coltivate in matraccio trypsinized per 3 minuti con 0,1% tripsina. Primaria cultura astrociti di ratto è trypsinized per 5 minuti con 0,1% tripsina.
Tri....
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Discussione
I saggi di cui sopra sono stati utilizzati in diversi studi che dimostrano il ruolo dei molteplici fattori coinvolti nella formazione di confine tra il Schwann-astrociti e limitato la migrazione delle cellule di Schwann in ambiente astrocitaria.
Comprendere la meccanismi alla base di queste manifestazioni è essenziale in quanto consentirebbe lo sviluppo di strategie per ottimizzare e migliorare l'integrazione di innesti cell Schwann dopo il trapianto e in tal modo di facilitare l'usc.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare Philippa Warren per il suo gentile aiuto.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 41966-029 | |
| HBSS | Invitrogen | 14170-088 | |
| FCS | Invitrogen | 10091-148 | |
| PSF | Invitrogen | 15240-062 | |
| BPE | Invitrogen | 13028-014 | |
| Forskolina | Calbiochem | 344273 | |
| Coprioggetti | VWR international | 631-0149 | |
| Coprioggetti (rettangolari) | Menzel-Glaser | BB022050A1 | |
| Vetrini con camera | Nalge Nunc international | 177380 | |
| Piastre a 4 pozzetti, piastre a 6 pozzetti | Nalge Nunc international | Piastre a 4 pozzettiPiastre a 6 pozzetti | |
| Anticorpo anti-p75 da ratto | EMD Millipore | MAB365 | |
| Anticorpo anti-GFAP | Dako | Z0334 | |
| Anticorpi secondari (coniugati con Alexa) | Invitrogen | A-11004 A-11034 | Capra anti-topo 568Capra anti-coniglio 488 |
| Anticorpi secondari biotinilati | Vector Laboratories | Capra anti-topo | |
| Compresse di DAB | Sigma-Aldrich | D4418 | |
| Kit ABC elite | Vector Laboratories | PK-6100 | |
| Pinzette fini | Fine Science Tools | 11295-10 | |
| Paraformaldeide | Sigma-Aldrich | P6168 | |
| Fluorosave | Calbiochem | 345789 |
Riferimenti
- Assouline, J. G. Rat astrocytes and Schwann cells in culture synthesize nerve growth factor-like neurite-promoting factors. Brain Res. 428, 103-118 (1987).
- Taylor, J. S., Bampton, E. T. Factors secreted by Schwann cells stimul....
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Ristampe e permessi
