Schwann-astrosit Etkileşimleri Analizi In Vitro Tahliller
Summary
Bu makale niyetinde kademeli biçimde tanımlamak için yaygın olarak kullanılan<em> In vitro</emSchwann hücre asrtocyte etkileşimleri inceleyerek kullanılan deneyleri.
Abstract
Schwann hücreleri, omurilik yaralanması sonrasında onarım stratejileri yaygın olarak kullanılan hücre biridir. Schwann hücreleri, aksonal rejenerasyon salgılayan büyüme faktörleri 1,2 destekleyen ve çimlenme ve büyümeyi teşvik adezyon molekülleri 3 ve ekstraselüler matriks molekülleri 4 sağlayarak yeteneğine sahiptir . Buna ek olarak 5 yaralanma yerinde demyelinated aksonlar myelinate.
Ancak, Schwann hücrelerinin nakli aşağıdaki implant sitesinden göç yoktur ve ev sahibi astrositler 6,7 ile karışmaz. Bu sonuç, Schwann hücreleri ve astrosit arasında keskin bir sınır oluşumu proksimale ve distale ana dokusu içine greft arka çıkmak için çalışıyor büyüyen aksonlar için bir engel oluşturmak. Schwann hücreleri ile temas Astrositler da hipertrofisi geçmesi ve inhibitör molekülleri 8-13 up-regüle.
In vitro tayinlerde modeli Schwann hücre astrosit etkileşimleri kullanılmış olan ve hücresel davranışın altında yatan mekanizma anlaşılmasında önemli olmuştur.
In vitro tayinlerde Bu sınır tayini, bir ko-kültür, sadece küçük bir boşluk iki hücre cephede ayıran farklı toprakları işgal her hücre tipi ile iki farklı hücre kullanılarak yapılır . Hücrelere bölmek ve göç gibi, hücresel iki cephede birbirlerine yakın ve nihayet çarpışır olsun. Bu davranış sınırında analiz edilecek iki hücre popülasyonlarının sağlar. Aynı tekniğin başka bir varyasyonu iki hücre popülasyonları kültür karışımı ve zamanla iki hücre tipleri ayırınız Schwann hücreleri ile birlikte birden fazla Schwann astrosit sınırları astrositler arasındaki adalar olarak bir araya clumped.
Iki hücre tipleri etkileşim eğitim kullanılan ikinci tahlil, hücresel hareketi diğer hücre tipi tek tabaka 14,15 yüzey üzerinde takip edilebilir göç testtir . Bu testte ters lamel testinin yaygın olarak bilinir. Schwann hücreleri, küçük cam parçaları üzerinde kültür ve astrosit mono tabakaları yüzey üzerine yüzü aşağı gelecek şekilde ters düz ve göç lamel kenarında değerlendirilir.
Her iki deneyleri hücresel dışlanma ve sınır oluşum yer altında yatan mekanizmaları inceleyerek etkili olmuştur. Bazı moleküllerin bu teknikleri N-Cadherins 15, Kondroitin Sülfat proteoglikanların (CSPGs) 16,17, FGF / Heparin 18, Efesliler / Ephrins 19 kullanılarak belirlendi.
Bu makale, kademeli moda sınır tahlil ve göç tahlil tanımlamak ve meydana gelebilecek olası teknik sorunları aydınlatmak için niyetindedir.
Protocol
Discussion
Yukarıda anlatılan testlerin Schwann astrositler ve astrositik ortamda sınırlı Schwann hücre göçü arasındaki sınır oluşumu dahil çoklu faktörlerin rolünü gösteren çeşitli çalışmalarda kullanılmıştır.
Stratejilerinin geliştirilmesi optimize etmek için izin ve Schwann hücre greft transplantasyonu takip entegrasyonu geliştirmek ve bunu yaparken de yenileyici aksonlar sağlayan ana dokusu içine greft arka çıkış kolaylaştırmak olduğu gibi bu olayların altı…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Philippa Warren Biz onu türlü yardım için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 41966-029 | ||
| HBSS | Invitrogen | 14170-088 | ||
| FCS | Invitrogen | 10091-148 | ||
| PSF | Invitrogen | 15240-062 | ||
| BPE | Invitrogen | 13028-014 | ||
| Forskolin | Calbiochem | 344273 | ||
| Coverlips | VWR-International | 631-0149 | ||
| Coverlips(rectangle) | MENZEL-GLASER (Supplied by Thermo Scientifics) | BB022050A1 | ||
| Chamber slides | Nunc-LabTek | 177380 | ||
| 4 well plates, 6 well plates | Nunc | 4 well plates 6 well plates |
||
| rat p75 antibody | Millipore, Temecula,California | MAB365 | ||
| GFAP antibody | Dako | Z0334 | ||
| Secondary antibodies (Alexa-conjugated) | Invitrogen | A-11004 A-11034 |
Goat anti mouse 568 Goat anti Rabbit 488 |
|
| Secondary biotinylated | Vector | Goat anti mouse | ||
| DAB tablets | Sigma-aldrich | D4418 | ||
| ABC elite kit | Vector | PK-6100 | ||
| Fine Forceps | FST | 11295-10 | ||
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6168 | ||
| Fluorosave | Calbiochem | 345789 |
References
- Assouline, J. G. Rat astrocytes and Schwann cells in culture synthesize nerve growth factor-like neurite-promoting factors. Brain Res. 428, 103-118 (1987).
- Taylor, J. S., Bampton, E. T. Factors secreted by Schwann cells stimulate the regeneration of neonatal retinal ganglion cells. J Anat. 204, 25-31 (2004).
- Reichardt, L. F. Integrins and cell adhesion molecules: neuronal receptors that regulate axon growth on extracellular matrices and cell surfaces. Dev Neurosci. 11, 332-347 (1989).
- Chiu, A. Y., Monteros, ., Espinosa de los, A., Cole, R. A., Loera, S., de Vellis, J. Laminin and s-laminin are produced and released by astrocytes, Schwann cells, and schwannomas in culture. Glia. 4, 11-24 (1991).
- Blakemore, W. F. Remyelination of CNS axons by Schwann cells transplanted from the sciatic nerve. Nature. 266, 68-69 (1977).
- Andrews, M. R., Stelzner, D. J. Evaluation of olfactory ensheathing and schwann cells after implantation into a dorsal injury of adult rat spinal cord. J Neurotrauma. 24, 1773-1792 (2007).
- Iwashita, Y., Fawcett, J. W., Crang, A. J., Franklin, R. J., Blakemore, W. F. Schwann cells transplanted into normal and X-irradiated adult white matter do not migrate extensively and show poor long-term survival. Exp Neurol. 164, 292-302 (2000).
- Lakatos, A., Franklin, R. J., Barnett, S. C. Olfactory ensheathing cells and Schwann cells differ in their in vitro interactions with astrocytes. Glia. 32, 214-225 (2000).
- Lakatos, A., Barnett, S. C., Franklin, R. J. Olfactory ensheathing cells induce less host astrocyte response and chondroitin sulphate proteoglycan expression than Schwann cells following transplantation into adult CNS white matter. Exp Neurol. 184, 237-246 (2003).
- Ghirnikar, R. S., Eng, L. F. Astrocyte-Schwann cell interactions in culture. Glia. 11, 367-377 (1994).
- Ghirnikar, R. S., Eng, L. F. Chondroitin sulfate proteoglycan staining in astrocyte-Schwann cell co-cultures. Glia. 14, 145-152 (1995).
- Plant, G. W., Bates, M. L., Bunge, M. B. Inhibitory proteoglycan immunoreactivity is higher at the caudal than the rostral Schwann cell graft-transected spinal cord interface. Mol Cell Neurosci. 17, 471-487 (2001).
- Fishman, P. S., Nilaver, G., Kelly, J. P. Astrogliosis limits the integration of peripheral nerve grafts into the spinal cord. Brain Res. 277, 175-180 (1983).
- Fok-Seang, J., Mathews, G. A., ffrench-Constant, C., Trotter, J., Fawcett, J. W. Migration of oligodendrocyte precursors on astrocytes and meningeal cells. Dev Biol. 171, 1-15 (1995).
- Wilby, M. J. N-Cadherin inhibits Schwann cell migration on astrocytes. Mol Cell Neurosci. 14, 66-84 (1999).
- Grimpe, B. The role of proteoglycans in Schwann cell/astrocyte interactions and in regeneration failure at PNS/CNS interfaces. Mol Cell Neurosci. 28, 18-29 (2005).
- Afshari, F. T., Kwok, J. C., White, L., Fawcett, J. W. Schwann cell migration is integrin-dependent and inhibited by astrocyte-produced. Glia. , (2010).
- Santos-Silva, A. FGF/heparin differentially regulates Schwann cell and olfactory ensheathing cell interactions with astrocytes: a role in astrocytosis. J Neurosci. 27, 7154-7167 (2007).
- Afshari, F. T., Kwok, J. C., Fawcett, J. W. Astrocyte-produced ephrins inhibit schwann cell migration via VAV2 signaling. J Neurosci. 30, 4246-4255 (2007).
