Behoud van Wolbachia in Cell-vrij medium

Summary

Deze video beschrijft een methode voor het zuiveren van Wolbachia pipientis van een Anopheles gambiae cellijn en vervolgens het kweken van de endosymbiont in cel-vrij medium. Een test voor de levensvatbaarheid van de bacterie is aangetoond.

Abstract

In deze video protocol worden de procedures aangetoond dat (1) te zuiveren Wolbachia symbionten uit gekweekte muggen cellen, (2) gebruik maken van een fluorescerende test om de levensvatbaarheid van het gezuiverde Wolbachia vast te stellen en (3) handhaven van de nu extracellulaire Wolbachia in cel-vrij medium . Gezuiverd Wolbachia in leven blijven in de extracellulaire fase, maar niet repliceren pas weer geënt in eukaryote cellen. Extracellulaire Wolbachia gezuiverd op deze manier zal levensvatbaar blijven voor minstens een week op kamertemperatuur, en mogelijk langer. Gezuiverd Wolbachia zijn geschikt voor micro-injectie, DNA-extractie en andere toepassingen.