Följande protokoll innehåller instruktioner för att anpassa människa inducerade pluripotenta stamceller (IPS) celler till feeder-fri kultur med hjälp av kompletta Knockout Serum Byte Feeder-Free medium (KSR-FF). När anpassad, instruktioner för kontinuerlig underhåll finns också.
Upptäckten 2006 att mänskliga och musfibroblaster kan programmeras att generera iPS-celler 1-3 med kvaliteter anmärkningsvärt liknar embryonala stamceller har skapat en värdefull ny källa av pluripotenta celler för läkemedelsutveckling, cellterapi och grundforskning.
GIBCO media och reagens har legat i framkant av pluripotenta stamcellsforskning år. Knockout DMEM kompletteras med Knockout Serum Byte är medierna i valet för embryonala stamceller tillväxt och nu iPS cellodling 3-9. Detta guldmyntfoten media system kan nu användas för feeder-fri kultur med tillägg av Knockout SR Growth Factor Cocktail.
Traditionella mänskliga ES och iPS cell metoder kultur kräver användning av mus eller människa fibroblast lager feeder eller matare med luftkonditionering medium. Dessa kultur metoder är arbetsintensiva, svåra att skala och det är svårt att hålla höfterna cellerna odifferentierade grund av odefinierade villkor. Invitrogen har utvecklat Knockout SR Cocktail Growth Factor så att du enkelt övergången höfterna cellkulturer till feeder-fri och samtidigt bibehålla din användning av Knockout SR.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Knockout DMEM/F12 | Cat. no. 12660-012 | Note: see appendix for the use of alternative DMEM products | ||
GlutaMAX-I | Cat. No. 35050-061 | |||
KnockOut Serum Replacement | KnockOut SR, Cat. no. 10828-028 | |||
KnockOut Serum Replacement Growth Factor Cocktail | KnockOut SR-GFC, Cat. no. A10580-01 | |||
FGF-basic, human recombinant protein, 10 μg | bFGF, Cat. no. PHG0024 | Note: see appendix for alternative bFGF pack sizes. | ||
2-Mercaptoethanol | Cat. no. 21985-023 | |||
Dispase | Cat. no. 17105-041 | Note: see appendix for alternative passaging methods. | ||
Geltrex hESC-Qualified Reduced Growth Factor Basement Matrix, 1 mL | Cat. no. A10480-01 | |||
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (D-PBS) without calcium and magnesium | Cat. no. 14190-144 | |||
Sterile Tissue Culture Hood | ||||
Incubator set at 37°C | ||||
Pipette-Aid | ||||
Water Bath set at 37°C | ||||
Sterile serological pipettes (5 mL, 10 mL) | ||||
Centrifuge | ||||
15 mL centrifuge tubes | ||||
60mm Tissue Culture treated dishes |