Inductie en Klinische Scoring van chronische-Relapsing experimentele autoimmune encefalomyelitis

Summary

Deze video toont de inductie en de klinische scoren van een diermodel van multiple sclerose: chronisch-recidiverende experimentele auto-immune encephalomyelitis in DA ratten. De ziekte, veroorzaakt door het immuniseren van ratten met een emulsie met hele rat het ruggenmerg en de volledige Freund's adjuvans, presenteert klinische symptomen lijken op de menselijke ziekte.

Abstract

Multiple sclerose (MS) is een chronische ontstekingsziekte van het centrale zenuwstelsel (CZS) die vaak bij jonge volwassenen. Het wordt gekenmerkt door demyelinisatie en gliale schrikken in gebieden verspreid in de hersenen en het ruggenmerg. Deze letsels veranderen zenuwgeleiding en induceren de invaliderende neurologische tekorten die variëren met de locatie van de gedemyeliniseerde plaques in het centraal zenuwstelsel (bijv. paraparese, verlamming, blindheid, incontinentie).

Experimentele auto-immune encephalomyelitis (EAE) is een model voor MS. EAE werd voor het eerst per ongeluk veroorzaakt bij mensen tijdens de vaccinatie tegen hondsdolheid, met behulp van virussen gekweekt op konijnen ruggenmerg. Resten van spinale geïnjecteerd met het geïnactiveerd virus veroorzaakte het CZS ziekte. Naar aanleiding van deze waarnemingen, was een eerste model van EAE beschreven in de niet-menselijke primaten geïmmuniseerd met een CNS homogenaat door rivieren en Schwenther in 1935. EAE is sindsdien gegenereerd in een variëteit van soorten en kunnen volgen verschillende cursussen afhankelijk van de soort / stam en immuniseren gebruikte antigeen. Bijvoorbeeld, immuniseren Lewis ratten met myeline basisch eiwit in emulsie met adjuvans induceert een acute model van EAE, terwijl dezelfde antigeen veroorzaakt een chronische ziekte bij cavia's.

De EAE-model hier beschreven wordt veroorzaakt door het immuniseren van DA ratten tegen DA rat het ruggenmerg in de emulsie in volledig Freund's adjuvans. Ratten ontwikkelen een oplopende slappe verlamming binnen 7-14 dagen na de immunisatie. Klinische symptomen volgen een relapsing-remitting koers over een aantal weken. Pathologie blijkt uit grote immuun infiltreert in het CZS en demyelinisatie plaques. Speciale overwegingen voor het nemen van de zorg voor dieren met EAE worden beschreven aan het eind van de video.

Protocol

Inductie en monitoring van chronische recidiverende EAE De emulsie is een 1:1 mengsel van antigeen in waterige oplossing toegevoegd aan aangevuld met Freund's volledig adjuvans. Het is zeer belangrijk om het antigeen toe te voegen aan de hulpstof en niet andersom! Er is een veel afval bij het maken van en het injecteren van een emulsie. Altijd bereiden 1,5 of 2 keer meer dan wat je nodig hebt. Gebruik geau…

Discussion

Er zijn een paar belangrijke overwegingen voor dit protocol.

Genetica van DA ratten zullen enigszins verschillen afhankelijk van welke fokker ze zijn gekocht. Deze verschillen kunnen verhogen of verlagen van de gevoeligheid van ratten inductie EAE. Als je ratten zijn meer vatbaar voor EAE wil je de kracht van de immunisatie te verminderen door het gebruik van niet-aangevuld met volledig Freund's adjuvans of zelfs incompleet Freund's adjuvans. U kunt ook het verminderen van de hoeveelheid emulsie geïnjecteerd of verdunnen va…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s Adjuvant	Reagent	Fisher	DF 311-360-5	Manufactured by Difco
Mycobacterium tuberculosis H37Ra	Reagent	Fisher	DF3114-33-8	Manufactured by Difco
DA rat	Animal	Harlan Sprague Dawley		Females, 7-9 weeks old.
Glass syringes – 5 ml	Tool	Fisher	14-823-10 B
Metal bridge – 18G	Tool	Fisher	14-825-17L
Luer Lok plastic syringes – 3 ml	Tool	Becton Dickinson	309585
Needles – 20G 1 1/2	Tool	Fisher	14-826-5C