Dissection de Oenocytes d'adultes Drosophila melanogaster</em
Summary
Chez les insectes, les oenocytes produire des composés d'hydrocarbures cuticulaires. Ces composés se protéger contre le dessèchement et faciliter la communication chimique. Ici nous démontrons une technique de dissection utilisée pour isoler les oenocytes de l'adulte<em> Drosophila melanogaster</em>, Et d'illustrer comment cette préparation peut être utilisée pour étudier les gènes impliqués dans la synthèse d'hydrocarbures.
Abstract
Dans<em> Drosophila melanogaster</em>, Comme dans d'autres insectes, une couche cireuse sur la surface externe de la cuticule, composée principalement de composés d'hydrocarbures, offre une protection contre la dessiccation et autres défis environnementaux. Plusieurs composés de ces hydrocarbures cuticulaires (CHC) fonctionnent aussi comme des signaux sémiochimiques, et en tant que telle médiation communication phéromonale entre les membres de la même espèce, ou, dans certains cas entre les différentes espèces, et influencer les comportements. Des cellules spécialisées appelées oenocytes sont considérés comme le principal site de synthèse du CCH. Cependant, on sait relativement peu sur l'implication de l'oenocytes dans la régulation de l'biosynthèse, le transport, et les voies de dépôt de contribuer à la sortie du CCH. Étant donné le rôle significatif que jouent les CSC dans plusieurs aspects de la biologie des insectes, y compris la communication chimique, la résistance dessiccation, et l'immunité, il est important d'acquérir une meilleure compréhension de la régulation moléculaire et génétique de la production du CCH au sein de ces cellules spécialisées. Le oenocytes adulte<em> D. melanogaster</em> Sont situés dans le tégument abdominal, et sont disposés en metamerically ruban comme les grappes de rayonnement le long de la surface intérieure de la cuticule chaque segment abdominal. Dans cet article, vidéo, nous démontrer une technique de dissection utilisé pour la préparation de oenocytes de l'adulte<em> D. melanogaster</em>. Plus précisément, nous fournissons une analyse détaillée étape par étape, la démonstration de (1) comment préparer les filets d'un adulte<em> Drosophile</em> Abdomen, (2) comment identifier les oenocytes et les distinguer des autres tissus, et (3) comment faire pour supprimer les grappes intactes oenocyte du tégument abdominal. Une brève illustration expérimentale de la façon dont cette préparation peut être utilisée pour examiner l'expression de gènes impliqués dans la synthèse d'hydrocarbures est inclus. La préparation disséqué démontrée ici permettra l'analyse détaillée moléculaires et génétiques de la fonction oenocyte chez la drosophile adulte.
Protocol
Discussion
Dans cet article nous présentons la vidéo d'un protocole de dissection détaillées pour la préparation de la oenocytes de l'adulte D. melanogaster d'une manière appropriée pour l'analyse moléculaire. Une base de texte abrégé compte de la méthode de dissection a été décrit ailleurs 2, et la préparation obtenue oenocyte a été démontré pour être appropriés pour l'extraction de l'ARN et la protéine 2. Utiliser cette préparation, il peut également …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous tenons à remercier Amsale Belay pour son aide dans le tournage de cet article vidéo. Ce travail a été financé par les IRSC, le CRSNG et les subventions à la CRC JDL.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard | Dow Corning | |||
| Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
| Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
| Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
| RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
| qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
| Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |
Riferimenti
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