Dissectie van Oenocytes tegen Adult Drosophila melanogaster</em
Summary
Bij insecten, het oenocytes produceren cuticulair koolwaterstofverbindingen. Deze verbindingen te beschermen tegen uitdroging en vergemakkelijken chemische communicatie. Hier laten we zien een dissectie techniek die gebruikt wordt om de oenocytes isoleren van volwassen<em> Drosophila melanogaster</em>, En illustreren hoe dit preparaat kan worden gebruikt om genen die betrokken zijn bij koolwaterstofsynthese studie.
Abstract
In<em> Drosophila melanogaster</em>, Net als in andere insecten, een wasachtige laag op de buitenkant van de cuticula, voornamelijk samengesteld uit koolwaterstofverbindingen, biedt bescherming tegen uitdroging en andere milieu-uitdagingen. Een aantal van deze cuticulair koolwaterstof (CHC) verbindingen ook functioneren als semiochemical signalen, en als zodanig pheromonal communicatie bemiddelen tussen leden van dezelfde soort, of in sommige gevallen tussen verschillende soorten, en het gedrag beïnvloeden. Gespecialiseerde cellen aangeduid als oenocytes worden beschouwd als de belangrijkste site voor CHC synthese. Echter, relatief weinig is bekend over de betrokkenheid van de oenocytes in de regulatie van de biosynthetische, transport, wegen en depositie bij te dragen aan CHC output. Gezien de belangrijke rol die CHCs spelen in de verschillende aspecten van insecten biologie, met inbegrip van chemische communicatie, verdroging weerstand en immuniteit, is het belangrijk om te krijgen een beter begrip van de moleculaire en genetische regulatie van CHC de productie binnen deze gespecialiseerde cellen. De volwassen oenocytes van<em> D. melanogaster</em> Bevinden zich in de buik integument, en zijn metamerically gekleed in lint-achtige clusters uitstralende langs de binnenkant cuticulair oppervlak van elke abdominale segment. In deze video artikel demonstreren we een dissectie techniek die gebruikt wordt voor de bereiding van oenocytes van volwassen<em> D. melanogaster</em>. In het bijzonder, bieden wij een gedetailleerde stap-voor-stap demonstratie van (1) hoe je filet bereiden een volwassene<em> Drosophila</em> Buik, (2) hoe de oenocytes te identificeren en onderscheiden ze van andere weefsels, en (3) hoe intact oenocyte clusters te verwijderen uit de buik integument. Een korte experimentele illustratie van hoe deze voorbereiding kan worden gebruikt om de expressie van genen die betrokken zijn bij koolwaterstofsynthese onderzoeken is inbegrepen. De ontleed voorbereiding laten zien hierin zal zorgen voor de gedetailleerde moleculaire en genetische analyse van oenocyte functie in de volwassen fruitvlieg.
Protocol
Discussion
In deze video artikel geven we een gedetailleerde dissectie protocol voor de voorbereiding van de oenocytes van volwassen D. melanogaster op een manier die geschikt is voor moleculaire analyse. Een verkorte tekst gebaseerde rekening van de dissectie methode is elders 2 beschreven, en de daaruit voortvloeiende oenocyte preparaat is aangetoond dat geschikt is voor de winning van zowel RNA en eiwit 2. Met behulp van deze voorbereiding kan het ook mogelijk zijn om methoden voor het kweken van …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We willen graag Amsale Belay bedanken voor haar hulp bij het filmen van deze video artikel. Dit werk werd gefinancierd door CIHR, NSERC en CRC beurzen aan JDL.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard | Dow Corning | |||
| Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
| Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
| Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
| RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
| qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
| Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |
Riferimenti
- Wielowiejski, H. Ueber das blutgewebe der insekten. Zeit. Wiss. Zool. 43, 512-536 .
- Krupp, J. J., Kent, C., Billeter, J. C., Azanchi, R., So, A. K., Schonfeld, J. A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D. Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster. Curr. Biol. 18, 1373-1383 (2008).
- Locke, M. Surface membranes, Golgi complexes, and vacuolar systems. Annu. Rev. Entomol. 48, 1-27 (2003).
- Billeter, J. C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster. Nature. 461, 987-991 (2009).
- Gould, A. P., Elstob, P. R., Brodu, V. Insect oenocytes: a model system for studying cell-fate specification by Hox genes. J. Anat. 199, 25-33 (2001).
- Lawrence, P. A., Johnston, P. Cell lineage of the Drosophila abdomen: the epidermis, oenocytes and ventral muscles. J. Embryol. Exp. Morphol. 72, 197-208 (1982).
- Johnson, M. B., Butterworth, F. M. Maturation and aging of adult fat body and oenocytes in Drosophila as revealed by light microscopic morphometry. J. Morphol. 184, 51-59 (1985).
- Gutierrez, E., Wiggins, D., Fielding, B., Gould, A. P. Specialized hepatocyte-like cells regulate Drosophila lipid metabolism. Nature. 445, 275-280 (2007).
- Marcillac, F., Bousquet, F., Alabouvette, J., Savarit, F., Ferveur, J. F. A mutation with major effects on Drosophila melanogaster sex pheromones. Genetica. 171, 1617-1628 (2005).
- Chertemps, T., Duportets, L., Labeur, C., Ueyama, M., Wicker-Thomas, C. A female-specific desaturase gene responsible for diene hydrocarbon biosynthesis and courtship behaviour in Drosophila melanogaster. Insect Mol. Biol. 15, 465-473 (2006).
- Legendre, A., Miao, X. X., Da Lage, J. L., Wicker-Thomas, C. Evolution of a desaturase involved in female pheromonal cuticular hydrocarbon biosynthesis and courtship behavior in Drosophila. Insect. Biochem. Mol. Biol. 38, 244-255 (2008).
- Shirangi, T. R., Dufour, H. D., Williams, T. M., Carroll, S. B. Rapid evolution of sex pheromone-producing enzyme expression in Drosophila. PLoS Biol. 7, e1000168-e1000168 (2009).
